NOTA: In questo esperimento, misurerai il tasso di respirazione cellulare per la germinazione dei semi misurando il tasso di scambio per l'ossigeno. Mentre l'ossigeno viene consumato per fornire energia, i semi in germinazione rilasciano anidride carbonica. Questa anidride carbonica viene assorbita dal carbonato di potassio e quindi la pressione gassosa complessiva del respirometro sarà ridotta. IDOLE: L'ipotesi sperimentale è che i semi in germinazione mostreranno un tasso di respirazione maggiore rispetto alle perle di vetro di controllo. Inoltre, a temperature più elevate, il tasso di respirazione cellulare nei semi aumenterà. Le ipotesi nulle sono che sia le perle di vetro che i semi in germinazione mostreranno un tasso simile di respirazione cellulare e che la temperatura non ha alcun effetto sulla respirazione.
Per impostare il controllo, prima rimuovi lo stantuffo da un microrespirometro preparato ed etichettalo rispettivamente con un "CR" o "CH", a seconda che si tratti della temperatura della sala di controllo o del trattamento riscaldato.
Aggiungi le microsfere di vetro a ciascuno dei microrespirometri fino al segno di 0,5 ml e spingi lo stantuffo nella siringa fino al segno di 1 ml.
Posiziona 3 - 4 rondelle sull'estremità svasata di ogni microrespirometro per appesantirle mentre sei nel bagnomaria. NOTA: Il microrespirometro si posizionerà all'estremità del tubo capillare.
Metti da parte i dispositivi di controllo.
Per impostare i respirometri sperimentali seduti, rimuovi lo stantuffo da un microrespirometro preparato ed etichettalo rispettivamente con "ER" o "EH", a seconda che si tratti della temperatura ambiente sperimentale o del trattamento riscaldato.
Misura 0,5 ml di semi in germinazione nella siringa di tubercolina del microrespirometro.
Quindi, spingi la siringa fino al segno di 1 ml.
Posiziona 3 - 4 rondelle sull'estremità svasata di ogni microrespirometro per appesantirle mentre sei nel bagno d'acqua.
Per utilizzare i microrespirometri, premere con cautela i microrespirometri "CR" e "ER" nel bagno d'acqua a temperatura ambiente. L'intera siringa deve essere sommersa, ma i tubi capillari devono essere completamente esposti. Rimuovere l'acqua dalla vasca fino a raggiungere questa posizione. Assicurarsi che la parte superiore del tubo capillare sia aperta.
Esegui la stessa procedura (passaggio 9) per i microrespirometri "CH" e "EH" per impostare il gruppo sperimentale a temperatura più alta.
Attendi 5 minuti prima di passare per consentire alla temperatura nei microrespirometri di equalizzarsi con il bagno d'acqua.
Aggiungi una singola goccia di fluido del manometro alla parte superiore di ciascuno dei quattro tubi capillari che sigillano le camere del microrespirometro. NOTA: Se le camere funzionano correttamente, il fluido del manometro verrà aspirato nella camera capillare.
Usa lo stantuffo impostato nella vasca per aspirare il fluido del manometro nel capillare. Fermarsi quando il fluido è circa a metà del tubo capillare. IMPORTANTE: I microrespirometri non devono essere disturbati una volta aggiunti alla vasca. Non urtare il tavolo né inserire o rimuovere nulla da o verso il bagnomaria una volta che le camere sono state sigillate ed equalizzate.
Segna il bordo inferiore del fluido del manometro che è più vicino alla camera. Rappresenta il punto zero del tempo.
Imposta un timer per suonare in 5 minuti.
Dopo 5 minuti, crea un nuovo segno dove si trova il fluido del manometro su ciascun microrespirometro. Ripetere ogni 5 minuti fino a quando non sono trascorsi 25 minuti o fino a quando il fluido del manometro non ha percorso l'intera lunghezza del tubo capillare.
Allora, rimuovi i respirometri dai bagni d'acqua.
Durante la pulizia, i manometri dovrebbero essere decostruiti per essere riutilizzati o gettati nella spazzatura.
