IMPORTANT: Oltre a indossare l'appropriato dispositivo di protezione individuale, assicurati di fare attenzione a tenere il viso lontano dalle colture in sospensione e di evitare di inalare reagenti. Non toccarti il viso durante l'esecuzione dell'esperimento. Lavati sempre le mani prima e dopo ogni esperimento.
Quando sei pronto per iniziare in sicurezza, controlla di avere una provetta o provette di cellule di E. coli competenti nel tuo secchiello del ghiaccio.
Quindi, trasferisci 50 μL da una di queste provette a ciascuna delle due nuove provette per microcentrifuga, una etichettata '–' e una etichettata '+'.
Quindi, pipetta 2 μL di plasmide p-GREEN nella provetta plus e muovi delicatamente la provetta per incorporare il plasmide in tutta la soluzione batterica. Ipotesi: L'ipotesi sperimentale è che su piastre che non contengono antibiotici, i batteri con o senza il plasmide possano sopravvivere, e quindi entrambi cresceranno prati di batteri. Al contrario, sulle piastre contenenti l'antibiotico ampicillina, cresceranno solo i batteri trasformati con successo con il plasmide di resistenza, mentre le piastre plasmidi meno non conterranno batteri. L'ipotesi nulla di questo esperimento è che non ci sarà alcuna differenza nella crescita batterica tra le piastre.
Incubare entrambe le provette sul ghiaccio.
Dopo 30 minuti, immergi entrambi i tubi a 3/4 di distanza nell'acqua di un bagno d'acqua a 42 °C per 30 secondi.
Al termine dell'incubazione a bagnomaria, rimetti le provette sul ghiaccio per 5 minuti, quindi aggiungi 950 μL di terreno SOC a temperatura ambiente in ciascuna provetta.
Incubare le provette in un agitatore a 37 °C per 60 minuti a 250 giri/min.
Mentre le provette sono in incubazione, etichettare i fondi di un LB e uno LB/ampicillina, o piastra AMP, "+ plasmide", e i fondi di una piastra LB e una piastra LB/AMP "- plasmide".
Alla fine dell'incubazione, pipettare 50 μL dalla provetta cellulare "+ plasmide" sia sulla piastra LB/AMP plus che sulla piastra LB plus.
Allora, con una punta fresca, aggiungi 50 μL dei batteri che non sono stati esposti al plasmide a ciascuna delle piastre negative.
Quindi, stendere ogni piastra utilizzando un nuovo puntale per pipetta.
Copri le piastre con i loro coperchi, e poi sigillale con pellicola da laboratorio.
Quindi conservare le piastre capovolte in un incubatore a 37 °C per 24 ore.
