Per iniziare, raccogli le piastre di coltura assegnate e poi rimuovi il Parafilm e il coperchio da una di esse.
Posiziona la piastra scoperta sotto un microscopio da dissezione e poi osserva le singole comunità all'interno di ogni quadrante della piastra.
Quindi, ripeti le osservazioni per ciascuna delle altre due specie batteriche.
Per eseguire la colorazione di Gram delle tue tre specie batteriche, prima etichetta le estremità di tre vetrini da microscopio con le iniziali di ciascuna specie batterica, le tue iniziali e la data. Ipotesi: In questo esperimento, l'ipotesi sperimentale potrebbe essere che sia possibile chiarire diverse specie e forme batteriche utilizzando la colorazione di Gram, e che i batteri Gram-positivi si colorino di viola con cristallovioletto mentre i batteri Gram-negativi appariranno rosa a causa della controcolorazione della safranina. L'ipotesi nulla potrebbe essere che tutti i tipi batterici manterranno entrambe le colorazioni allo stesso modo e la colorazione non aiuterà a chiarire la loro specie o forma.
Per iniziare la prima macchia, attacca una clip al vetrino per facilitarne la manipolazione. Per ogni striscio batterico, ricordarsi di assicurarsi di utilizzare un circuito di inoculazione pulito e sterilizzato a fiamma.
Posiziona due anelli di acqua distillata sterile al centro del vetrino.
Dopo aver sterilizzato nuovamente l'ansa, raffredda l'ansa toccando più volte una parte non inoculata dell'agar.
Quindi, rimuovi una piccola quantità di coltura da una colonia isolata e mescolala con l'acqua sul vetrino.
Lascia asciugare il vetrino a temperatura ambiente e fissa a caldo lo striscio facendolo passare rapidamente attraverso una fiamma.
Una volta asciutto, pipetta diverse gocce di cristallo violetto sul vetrino e lascialo riposare per due o tre minuti.
Sciacquare accuratamente il vetrino con acqua distillata puntando il flusso diretto verso la parte superiore del vetrino, permettendo all'acqua di fluire delicatamente verso il basso. Non dirigere il flusso d'acqua direttamente verso lo striscio.
Quindi, copri il vetrino con lo iodio di Gram, lascialo riposare di nuovo per due minuti, quindi risciacqua delicatamente con acqua distillata.
Decolora il vetrino con etanolo al 95% fino a quando la macchia non si lava più via.
Immediatamente, sciacquare il vetrino con acqua distillata. Ciò limiterà l'eccessiva decolorazione.
Quindi, aggiungi diverse gocce di colorante di contrasto safranina e lascia agire per 30 s. Questo colorerà tutte le cellule Gram-negative presenti.
Sciacquare delicatamente il vetrino con acqua distillata e asciugare con carta assorbente.
Dopo aver colorato gli altri due vetrini allo stesso modo (passaggi 6 – 17), osservali ciascuno con un microscopio.
Usa prima un obiettivo a bassa potenza per effettuare regolazioni grossolane. Quando trovi una sezione ideale, passa agli ingrandimenti più alti.
Dopo ulteriori immagini e la regolazione dello striscio con un obiettivo di media potenza, aggiungere olio da immersione direttamente allo striscio. NOTA: L'olio è necessario per obiettivi ad alta potenza che forniranno le migliori micrografie.
Ora, usa matite colorate per disegnare i batteri osservati nei cerchi di ingrandimento appropriati e riempi le caratteristiche osservate nella colonna appropriata, annotando la forma dei batteri e se è Gram-positiva, identificata da una colorazione viola più scura, o Gram-negativa, identificata con colorazione rosa.
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Infine, ripeti l'osservazione, il disegno e la caratterizzazione per gli altri due vetrini batterici colorati.
