Sequenziamento di Sanger

Per alcuni esperimenti o diagnosi, potrebbe essere necessario ottenere la sequenza nucleotidica dell'intero genoma di un organismo per ottenere una comprensione più profonda dei geni o degli alleli presenti, della loro funzione e delle malattie associate. Ciò può essere ottenuto utilizzando il sequenziamento del DNA.

Due note tecniche tradizionali di sequenziamento del DNA sono il metodo di sequenziamento Sanger e il metodo Maxam-Gilbert.

Nel sequenziamento Sanger - noto anche come sequenziamento della terminazione della catena o sequenziamento dideossinucleotidico - il DNA stampo puro da sequenziare viene amplificato con PCR in presenza di opportuni primer, dNTP e basi modificate, chiamati dideossinucleotidi o ddNTP.

I dideossinucleotidi mancano del gruppo ossidrilico dei deossinucleotidi, il che limita la loro capacità di formare legami fosfodiestere con nucleotidi adiacenti.

Ogni dideossinucleotide è inoltre etichettato con un'etichetta fluorescente diversa per facilitarne il rilevamento.

Il primo passo è quello di denaturare il DNA stampo in un DNA a filamento singolo.

Quindi, quando i primer si legano alla regione di interesse, la DNA polimerasi inizia ad aggiungere nuovi nucl