Microiniezione è un metodo consolidato ed efficace per l'introduzione di sostanze estranee in embrioni di zebrafish fecondato. Qui, dimostriamo una tecnica robusta microiniezione per l'esecuzione di sovraespressione di mRNA, e morfolino oligonucleotide studi gene knockdown in zebrafish.
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Articolo metodologico
Microiniezione di mRNA e oligonucleotidi antisenso Morpholino in embrioni di zebrafish.
In questo articolo
Sommario
Abstract
Uno strumento essenziale per indagare il ruolo di un gene durante lo sviluppo è la capacità di eseguire knockdown gene, l'iperespressione, e gli studi misexpression. In zebrafish (
Protocollo
Parte 1: Preparazione di micropipette, e piatti da camera microiniezione
- Fabbricare micropipette da riscaldamento e tirando tubi in vetro borosilicato capillari (World Precision Instruments, Inc., 1B100-4) in un dispositivo estrattore micropipetta (Sutter Instruments Inc., Flaming / Brown P-97). Conservare in una capsula di Petri in cima alla piccola quantità di argilla o di nastro adesivo.
- Versare 1,5% agarosio (American Bioanlytical, Inc., AB00972-00500) a 1x piatti medio E3 stampato con depressioni a forma di cuneo che servirà come un metodo semplice per tenere gli embrioni durante l'iniezione (come descritto in 'Il libro Zebrafish....
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Discussione
Microiniezione in embrioni di zebrafish è una tecnica consolidata e robusta per esplorare il ruolo di un particolare gene nello sviluppo. Le applicazioni includono l'iperespressione, misexpression e saggi knockdown del gene di interesse così come l'analisi epistatico fra più geni. Microiniezione in zebrafish è stato ampiamente utilizzato per la generazione di animali transgenici, e mappatura destino delle cellule ai primi embrioni blastula 5,6,7,8,9. Inoltre, l'applicazione di questa tecnica serve.......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dal NIH e PKD fondazione a ZS. Tutti gli esperimenti sugli animali sono state condotte in base a Yale Animal Resources Center (Yarc) e cura degli animali istituzionali e Usa Committee (IACUC) le linee guida.
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Materiali
Tutti gli altri materiali sono elencati nel protocollo.
Riferimenti
- Westerfield, M. The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , 4th, University of Oregon. (2000).
- Nasevicius, A., Ekker, S. Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish. Nat Genet. 26, 216-220 (2000).
- Draper, B., Morcos, P., Kimmel, ....
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Ristampe e permessi
