Articolo metodologico

Fabbricazione di miogenici Costrutti di ingegneria tessutale

DOI:

10.3791/1137

⸱

1 maggio 2009

 , 
1Department of Anesthesiology, Children's Hospital Boston and Harvard Medical School, 2Perioperative and Pain Medicine, Children's Hospital Boston and Harvard Medical School

In questo articolo

Sommario

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In questo studio dimostriamo realizzazione di costruzioni a base di collagene dei tessuti, contenenti mioblasti scheletrici. Questi costrutti ingegnerizzati in 3-D possono essere usati per sostituire o riparare i tessuti In vivo. Per i nostri scopi, abbiamo progettato questi come un canale atrioventricolare elettrico per la riparazione di blocco cardiaco completo [1].

Abstract

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Nonostante il fatto che i pacemaker elettronici sono salvavita dispositivi medici, le loro prestazioni a lungo termine nei pazienti pediatrici può essere problematico a causa delle restrizioni imposte dalle ridotte dimensioni di un bambino e la loro crescita inevitabile. Di conseguenza, vi è una reale necessità di terapie innovative progettate specificamente per i pazienti pediatrici con disturbi del ritmo cardiaco. Proponiamo che una alternativa biologica conduttivo costituito da una matrice a base di collagene contenenti autologously cellule derivate potrebbe adattarsi meglio alla crescita, ridurre la necessità di interventi chirurgici ricorrenti, e migliorare notevolmente la qualità della vita per questi pazienti. Nel presente studio, si descrive una procedura per l'integrazione primaria mioblasti scheletrici colture di cellule in una matrice idrogel di moda un costrutto tessuto chirurgicamente impiantabili che servirà come un condotto elettrico tra le camere superiori e inferiori del cuore. In ultima analisi, possiamo anticipare utilizza questo tipo di ingegneria tessutale per ripristinare atrioventricolare di conduzione elettrica nei bambini con arresto cardiaco completo. In considerazione di questo, abbiamo isolare mioblasti dai muscoli scheletrici di ratti neonati Lewis e la piastra di loro su piatti tessuto laminina rivestite cultura utilizzando una versione modificata di protocolli stabiliti

Protocollo

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Parte 1: Assemblare costruire stampi

  1. Utilizzare una lama di rasoio di dimezzare tubi in silicone (VWR) e tagliarla in 3 pezzi cm di lunghezza.
  2. Mettere una goccia di protesi in silicone RTV di qualità adesiva (Rhodia) all'interno di ciascuna estremità del tubo.
  3. Rapidamente posto un piccolo pezzo (1 cm x 1 cm) di poliestere mesh (McMaster-Carr) sulla caduta di silicone e allinearlo con l'estremità del tubo. Questo presenta una superficie leggermente rialzato e piano per il fissaggio costruire. Ripetere l'operazione per l'altra estremità.
  4. Lasciare lo stampo ad asciugare a temperatura ambiente per 3 giorni. E '....

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Discussione

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Le forme in cui il costrutto tessuto sarà cast può essere effettuato in qualsiasi forma e dimensione, ma ci deve essere almeno due punti di attacco. In caso contrario, la matrice e le cellule formano una struttura sferica e le cellule muoiono. Nel presente protocollo, si descrive l'utilizzo di una maglia in poliestere per questo scopo, ma abbiamo anche utilizzato con successo in rete in acciaio inox. Ovviamente, più grandi stampi richiederà più celle e un volume maggiore di altri ingredienti. Quando si effettuano gl.......

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Dichiarazioni

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Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso in bambini Hospital di Boston.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è sostenuto da borse di ricerca dal National Institutes of Health (HL068915; HL088206), un premio Ricercatore Nuovo dal Fondo di ricerca Thrasher, e contributi al fondo di conduzione cardiaca presso il Children Hospital di Boston.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Tubazione in siliconeVWR international60985-724
Adesivo in siliconeRhodia SiliconesMED ADH 4300 RTV
Rete in poliestereMcMaster-Carr93185T17
LamininaSigma-AldrichL2020
Miscela nutritiva F-10 HAMSigma-AldrichN6908
Serum fetale bovinoAtlanta BiologicalsS11550
Penicillina/StreptomicinaInvitrogen15140
FungizoneInvitrogen15290-018
Dispasi-2Roche Group10295825001
Collagenasi 2Worthington Biochemical46H8863
Fattore di crescita dei fibroblasti di basePromega Corp.G5071
Piastre per colture cellulari da 150 mmBD Biosciences353025
Tripsina-EDTA 0,05% (1X)GIBCO, by Life Technologies25300
Soluzione salina equilibrata di Hanks 1XInvitrogen14170-112
NaHCO3 al 7,5%GIBCO, by Life Technologies25080-094
Filtro cellulare da 70 μmBD Biosciences352350
Piastre a 6 pozzettiBD Biosciences353046
Flacone conico da 50 mLBD Biosciences352098
Flacone conico da 15 mLBD Biosciences352099
Filtro da 0,2 μmNalge Nunc international194-2520

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
  2. Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125

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Tag

Isolamento di mioblasti scheletricimatrice a base di collagenefabbricazione di costrutti tissutaliratti Lewis neonatalipiastre rivestite di lamininacollagene di tipo 1colata di stampi in idrogelvalutazione in vitroimpianto chirurgico

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