Protocollo per vaccinia infezione di cellule HeLa e analisi di accoglienza e l'espressione genica virale. Parte 1 di 3.
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Articolo metodologico
Vaccino infezione da virus e analisi temporale di espressione genica del virus: Parte 1
In questo articolo
Sommario
Abstract
La famiglia
Protocollo
Parte 1: Impostare l'infezione
- Crescere le cellule HeLa in fiaschi e aspettare che le cellule sono circa l'80% confluenti.
- Preparare abbastanza virale medio di crescita per l'esperimento: regolare DMEM con il 2% FBS e senza antibiotici aggiunti.
- L'infezione può essere effettuata sia con uno stock di greggio virus vaccinia con un titolo noto, o saccarosio virus purificato con un titolo noto se sei preoccupato per ospitare espressione genica.
- Se si utilizza virus saccarosio purificato, procedere direttamente alla parte 2.
- Se si utilizza un magazzino greggio virus vaccinico, appena prima l'infezione,....
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Discussione
Passaggi critici
Part 1 & 2
Ci sono diversi passaggi critici della costituzione di una infezione sincrona vaccinia, il primo sonicazione facendo attenzione (o trypzinizing) del virus, in modo da disaggregare le particelle del virus. Vaccino è fortemente incline alla aggregazione e disgregazione di particelle del virus è importante per garantire anche l'infezione delle cellule. Al fine di ottenere una infezione sincrona, un alto MOI (maggiore di 2) deve essere .......
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Ringraziamenti
Whitehead Institute Fellows Fondi
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Reagente TRIzol | Reagente | Invitrogen | 15596-026 | Reagenti simili, come TriPure di Roche, funzionano altrettanto bene. |
| Reagente BCP per la separazione delle fasi | Reagente | Molecular Research Center | BP151 | |
| Set DNasi priva di RNasi | Reagente | Qiagen | 79254 | Il trattamento con DNasi è un passaggio opzionale. |
Riferimenti
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
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Ristampe e permessi
