Articolo metodologico

Creazione di Murine aneurismi dell'aorta addominale Sperimentale con elastasi

DOI:

10.3791/1280

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23 luglio 2009

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1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

In questo articolo

Sommario

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Questo video mostra come per indurre aneurismi dell'aorta addominale (AAA) nei topi via transitoria infusione intraluminale di elastasi pancreatica porcina nel segmento infrarenale dell'aorta addominale. Il modello ha la possibilità di aggiungere visione ampia in biologia e la patologia di AAA per la nascita di numerose transgenici e topi knockout del gene.

Abstract

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Transitori infusione intraluminale di elastasi pancreatica porcina nel segmento infrarenale dell'aorta addominale è il modello animale più usato di aneurisma dell'aorta addominale (AAA) da quando è stata descritta per la prima nei ratti da Anidjar e colleghi. 1 Il razionale per il suo sviluppo si è basata sulla natura interrotto di elastina osservato in AAA. Questo modello di ratto è stato modificato per produrre AAA nella regione aortica infrarenale di topi. 2 Il modello ha la possibilità di aggiungere visione ampia in biologia e la patologia di AAA per la nascita di numerose transgenici e topi knockout del gene. Inoltre, è una valida piattaforma per testare potenziali agenti terapeutici per AAA. In questo video, dimostriamo la procedura di elastasi infusione AAA utilizzato nel nostro laboratorio.

I topi vengono anestetizzati con isoflurano 2,5%, e una laparotomia viene eseguita in condizioni sterili. Il aortais addominale isolato con l'aiuto di un stereomicroscopio operativo (Leica). Dopo aver posizionato le legature temporaneo intorno dell'aorta prossimale e distale, un aortotomy viene creato alla biforcazione con la punta di un 30-gauge. Un calore-conica segmento di tubo in polietilene PE-10 è introdotto attraverso il aortotomy e assicurato. Il lume aortico è successivamente perfuso per 5-15 minuti a 100 mm Hg con soluzione salina di tipo I contenenti elastasi pancreatica porcina (4,5 U / mL; Sigma Chemical Co.). Dopo aver rimosso il catetere perfusione, la aortotomy viene riparato senza restringimento del lume.

Protocollo

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  1. I topi vengono anestetizzati con isoflurano inalato 2.0 3.0ml / L.
  2. L'addome è rasata e rimosso con alcool e Betadine.
  3. Il mouse è posizionato supino sul campo operatorio.
  4. Guanti sterili sono indossati dal chirurgo, e gli strumenti utilizzati sono stati sterilizzati con acqua calda sterilizzatore tallone.
  5. Una lunga incisione addominale mediana è fatto. Contenuto addominale sono ritratta fuori l'addome con una garza sterile per esporre l'aorta addominale.
  6. L'aorta addominale è isolato dal livello della vena renale sinistra alla biforcazione.
  7. I rami dell'aorta addominale sono esposti e legatura 10-0 con punti di sutura. Tutti i rami aortica 1,0 centimetri all'interno della biforcazione sono legato.
  8. Temporaneo 6,0 legature di seta sono disposte intorno al porzioni prossimale e distale dell'aorta
  9. Un aortotomy è creata alla biforcazione con un 30-gauge.
  10. Calore-tubi conici in polietilene (PE-10) è introdotto attraverso il aortotomy e fissato con un pareggio.
  11. Utilizzando una borsa salina appeso all'altezza di 136 cm a calibrare 100 mmHg, l'aorta è riempito con la soluzione fisiologica contenente 4,5 U / mL di tipo I suini elastasi pancreatica. L'aorta si dilata normalmente a 150-170% del suo diametro originale durante la perfusione elastasi 5-15 minuti.
  12. Il catetere perfusione viene quindi rimosso e il aortotomy chiuso con una sutura 10-0 per evitare la costrizione.
  13. Dopo la aortotomy è chiuso, la legatura distale viene rimosso.
  14. Se vi è poca o nessuna emorragia dal aortotomy riparato, la legatura prossimale viene rimosso. L'aorta ampliato riempie di sangue immediatamente.
  15. Gli intestini sono restituiti al ventre, e la ferita è chiusa in due strati con 6-0 in nylon / polipropilene sutura.
  16. 0,25% Bupivicaime gocce (una goccia appx per ogni centimetro di dimensioni incisione) sono posti sulla ferita e una dose di Caprofen (5mg/kg) è somministrato per via sottocutanea.
  17. Il mouse è posizionato su una zona calda e recupera in genere entro 15 minuti.

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Figura 1. Risultato rappresentante di elastasi indotta AAA.

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Discussione

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Precedenti studi hanno notato notevoli lotto a lotto variazione sviluppo AAA da differenti preparazioni elastasi commerciale 3. Quindi, è fondamentale per il monitoraggio dei lotti di produzione così come di avere gruppi di controllo appropriate al fine di documentare la capacità della preparazione per indurre AAA.

È interessante notare che la suscettibilità allo sviluppo di AAA in questo modello dipende dal ceppo di topi utilizzato 3. Il mouse usato nel video corrente ...

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato la concessione SCCOR "Malattia AAA: Meccanismi, Stratificazione e trattamento" (P50 HL083800-03) dal National Institutes of Health

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Elastasi pancreatica porcina di tipo IReagenteSigma-AldrichE1250
tubulatura in polietilene (PE-10)BD Biosciences427400
CHANGE-A-TIPBovie Medical Corporation18010-00 (FST)lame da elettrocoagulazione
LEICA MZ6Leica Microsystemsstereomicroscopio
LEICA DFC290HDLeica Microsystemsvideocamera USB
Image Pro Express ver. 6.0Media Cybernetics Inc.software

Riferimenti

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  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

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