Su larga scala immunolocalizzazione di proteine bersaglio attraverso tutto il cervello dei primati è possibile utilizzando tessuti romanzo di inclusione e di sezionamento metodi combinati con l'impiego di attrezzature creativo per la colorazione in batch di più liberamente fluttuanti sezioni in un dato momento.
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Articolo metodologico
Immunostaining lotto per la grande rivelazione di proteine nel cervello della scimmia Whole
In questo articolo
Sommario
Abstract
Immunoistochimica (IHC) è una delle tecniche di laboratorio più utilizzato per la rilevazione di proteine bersaglio
Protocollo
Immunohistochemisty è una delle tecniche più utilizzate per la caratterizzazione di espressione della proteina nel cervello di vari modelli sperimentali animali. E 'relativamente facile da condurre sistematiche procedure di immunoistochimica sul cervello di roditori e di altri comuni modelli sperimentali con le dimensioni del cervello simili. Tuttavia, non c'è lavoro pubblicato a nostra conoscenza, che fornisce un resoconto completo di come svolgere le procedure di immunolocalizzazione tale attraverso un intero cervello della scimmia. Quello che segue è una descrizione dettagliata di come preparare un intero cervello di scimmia per la grande rivelazione immun....
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Discussione
Ci sono due passi fondamentali in questa procedura che rendono grande il rilevamento di proteine in un cervello della scimmia intero possibile. Uno è il protocollo di inclusione e di sezionamento, che rimane la conoscenza di proprietà della NSA. L'altra è l'uso di piatti colorazione e cesti forniti da HistoTools. Quest'ultimo consente di utilizzo semplice e veloce di molti (~ 40) sezioni in un dato momento. Inoltre fornisce i mezzi per trattare in modo uniforme tutte le sezioni in tutto il cervello e fa pe.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Siamo grati a Frank Ervin, Roberta Palmour e il personale delle scienze comportamentali Laboratori Fondazione situato a St Kitts, nelle Indie Occidentali, per il supporto continuo del nostro lavoro primati. Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa di studio Fragile X Research Foundation of Canada (FXRFC) a SZ e - sovvenzioni di funzionamento dal Canadian Institutes of Health Research (AC) e il National Engineering and Research Council del Canada (MP).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| anticorpo monoclonale anti-FMRP | Chemicon International | MAB2160 | Richiede il recupero dell'antigene nei tessuti fissati. |
| anticorpo monoclonale anti-NeuN | Chemicon International | MAB377 | N/D |
| anticorpo monoclonale anti-Neurofilamento H | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/D |
| Soluzione per la rivelazione dell'antigene | Vector Laboratories | H-3300 | N/D |
| Serum equino normale | Invitrogen | 16050122 | 500 mL |
| Anti-topo IgG (H+L) biotinilata, prodotta in cavallo | Vector Laboratories | BA-2000 | |
| Kit VECTASTAIN ABC (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1,5 mg |
| Piatto per colorazione di sezioni galleggianti | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm |
| Contenitore trasportabile per colorazione | HistoTools | 10012 | grande (adatto al piatto 12 x 65 mm) |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/D |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/D |
Riferimenti
- Guide to the Care and Use of Experimental Animals. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of ....
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Ristampe e permessi
