Articolo metodologico
Questo è un metodo per la generazione di embrioni di zebrafish gynogenetic diploide (embrioni il cui unico contributo genetico proviene dalla madre), bloccando la seconda divisione meiotica subito dopo la fecondazione con luce ultravioletta-inattivato sperma. Embrioni EP non sono completamente omozigoti per ricombinazione durante la prima divisione meiotica, tuttavia sono omozigoti a tutti i loci che non sono stati separati dalle loro centromero dalla ricombinazione.
Eterozigosi negli eucarioti diploidi spesso rende studi genetici ingombrante. I metodi che producono prole vitale diploide omozigote direttamente dalle femmine eterozigoti permettono F1 femmine mutagenizzate di essere proiettati direttamente per le mutazioni deleterie in uno schermo accelerato in avanti genetica. Streisinger et al.
Panoramica di pressione all'inizio
Nota: le ricette per molti dei reagenti utilizzati in questo protocollo come tricaine, pesci d'acqua salina e Hanks sono disponibili online nel capitolo 10 del Libro Zebrafish 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
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E 'importante assicurarsi che gli embrioni prodotti con questo metodo sono diploidi gynogenetic vero. Come controlli, generano una frizione delle uova diploidi normali (tenendo da parte alcune delle spermatozoi senza UV-inattivazione) e una serie di embrioni aploidi (tenendo da parte una frizione delle uova fecondate con gli spermatozoi UV senza passare per la procedura di PE). A 1 giorno dopo la fecondazione degli embrioni aploidi hanno un asse corto del corpo, il cervello e la morfologia irregolare somite. Haploid.......
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Metodi per la fecondazione in vitro e diploidi gynogenetic sono stati sviluppati per zebrafish da Charline Walker nel laboratorio di Giorgio Streisinger presso l'Università dell'Oregon negli anni 1970 e 1980. Il metodo descritto qui è invariato rispetto a protocolli Charline, che sono disponibili per intero nel Libro Zebrafish 3.
Metodi per la fecondazione in vitro e diploidi gynogenetic sono stati sviluppati per zebrafish da Charline Walker nel laboratorio di Giorgio Streisinger presso l'Università dell'Oregon negli anni 1970 e 1980. Il metodo descritto qui è invariato rispetto a protocolli Charline, che sono d....
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tricaina | Sigma-Aldrich | ||
| Vetrino da orologio | |||
| Pressa francese | |||
| Cilindro a pressione | |||
| Instant Ocean | |||
| Pipette di Pasteur | Tagliare l'estremità stretta, lucidare con la fiamma | ||
| Incrocio UV | |||
| Microcapillari |
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