Questo protocollo descrive l'isolamento e la successiva espansione delle cellule stromali mesenchimali e le cellule endoteliali che formano colonie senza l'uso di siero animale per generare le coppie a fini di trapianto autologo sperimentali.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Isolamento e di espansione degli animali siero gratuito di cordone ombelicale umano derivato cellule stromali mesenchimali (MSC) e cellule endoteliali progenitrici formanti colonia (ECFCs)
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il cordone ombelicale è una ricca fonte di cellule progenitrici con alto potenziale proliferativo delle cellule stromali mesenchimali compreso (designato anche le cellule staminali mesenchimali, MSC) e cellule progenitrici endoteliali formanti colonia (ECFCs). Entrambi i tipi di cellule hanno un ruolo chiave nel mantenere l'integrità dei tessuti e sono probabilmente coinvolti nei processi di rigenerazione e formazione di tumori.
Per studiare la loro biologia e la funzione in termini comparativi, è importante avere entrambi i tipi di cellule a disposizione dallo stesso donatore. Può anche essere utile per scopi rigenerativi per derivare cellule staminali mesenchimali e ECFCs dal tessuto stesso.
Poiché la terapia cellulare dovrebbe finalmente trovare la loro strada dal laboratorio al letto abbiamo stabilito un nuovo metodo per isolare ed espandere ulteriormente le cellule progenitrici senza l'uso di proteine animali. Pool di lisato piastrinico umano (pHPL) sostituito siero fetale bovino in tutte le fasi del nostro protocollo al fine di evitare completamente il contatto delle cellule alle proteine xenogene.
Questo video dimostra una metodologia per l'isolamento e l'espansione delle cellule progenitrici da un cordone ombelicale.
Tutti i materiali e le procedure saranno descritte.
Protocollo
Parte 1: Installazione
1. Preparazione del terreno di coltura
Prima di iniziare la preparazione media di raccogliere tutti i materiali e gli strumenti di cui avrete bisogno.
Scongelare 2 x 56 ml di lisato pool delle piastrine umane (pHPL, self-made: riferimento 1 & JOVE # 1523), 10 ml di una penicillina 100x / soluzione di streptomicina, 2 x 5 mL di L-Glutammina (entrambi Sigma).
Scongelare la citochina e aliquote fattore di crescita (VEGF, bFGF, EGF, IGF, idrocortisone, acido ascorbico, eparina, Amfotericina forniti come 'quots singolo'), rettificato per integrare 1 bott....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
C'è una varietà di fonti da cui ottenere cellule staminali mesenchimali o ECFCs compreso il midollo osseo, tessuto adiposo, sangue del cordone ombelicale, ecc
E 'necessario per ottenere entrambi i tipi di progenitori dalla stessa fonte di confrontare direttamente il coinvolgimento dei diversi tipi di cellule in processi come tessuti e la rigenerazione nave o contributo alla progressione del tumore.
La facilità con cui isolare e successivamente studiare le.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi da dichiarare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano per la fornitura di Katharina Schallmoser pHPL, Eva Rohde e Nicole Hofmann per gli utili commenti al manoscritto, Daniela Thaler e Margaretha P. hwirth di assistenza tecnica, Monica Farrell per la modifica linguistica, Uwe Lang, Margit Holzapfel e Sandra Eppich al Dipartimento di Ostetricia per fornire le corde.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione per la ricerca austriaco (FWF, concedere N211-NAN per DS), l'Agenzia austriaca per la promozione della ricerca (FFG, concedere N200 per DS) e da The Adult Stem Cell Research Foundation (AR). AR è un collega della Medicina Molecolare del programma di dottor....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| MEM alfa modificato | Sigma-Aldrich | ||
| L-glutammina | Sigma-Aldrich | ||
| Penicillina/Streptomicina | Sigma-Aldrich | ||
| EBM | Lonza Inc. | ||
| Single cytokine quots | Lonza Inc. | ||
| Flaconi da 75 cm2 | Corning | ||
| Piastre da 150 cm2 | Corning | ||
| Spazzola per cellule | Corning | ||
| Tripsina/EDTA | Sigma-Aldrich | ||
| Anticorpi monoclonali | BD Biosciences | ||
| PBS | |||
| Provette da 50 ml | Falcon BD | ||
| Filtro da 500 mL, dimensione pori 20 μm | EMD Millipore | ||
| Eparina senza conservanti | Biochrom AG |
Riferimenti
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Hu....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
