Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

wolbachia infezione batterica in drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia infezione batterica in Drosophila

Il mio nome è Voia Friedman. Sono ricercatrice associata presso l'Università di Princeton. Oggi vi illustrerò alcuni protocolli che ho sviluppato per trasmettere l'infezione, inizialmente per isolare, per tornare indietro dall'addome di moscerini infetti, e successivamente per aiutare ad iniettare il ceppo infetto in moscerini non colpiti.Quindi, in pratica, questo è un protocollo molto semplice per isolare lui oly per le basi. E utilizzerai questo dispositivo di, di mepo che contiene un filtro che va sopra un E. Quindi, fondamentalmente, devi mettere te, partiamo da circa cento moscerini. Anestetizzi i moscerini, li inserisci nel dispositivo con filtro, puoi semplicemente usare un imbuto e questo si adatterà molto facilmente a questo dispositivo e lo laverai con etanolo al 70%.Prendete semplicemente il pellet, eliminate il futuro, potete scartare l'etanolo, quindi dopo la terza lavata eseguite l'ultimo lavaggio con acqua molecolare perché non volete avere batteri con tracce di etanolo. Bene, poi passate semplicemente a una nuova provetta e centrifugate in un microcentrifugo, un vero microcentrifugo, per due minuti. Successivamente, potete procedere con l'iniezione. Si nutrono solo le mosche non trattate.Quindi, fondamentalmente, prendete un nastro adesivo doppio e, di solito, questi nastri adesivi doppi hanno due lati, uno dei quali è più adesivo dell'altro. Lasciate il lato più adesivo rivolto verso l'alto, poiché è il lato su cui incollerete i moscerini. In pratica, se avete un apparecchio per gas con una luce posizionata sopra, non ci sarà flusso di gas e i moscerini si risveglieranno se si trovano sopra il vetrino.Quindi puoi semplicemente indirizzare il flusso, creando una piccola cappa o una piccola camera utilizzando del nastro. Poi indirizzi il gas sulle mosche. Quindi posizioni qui la tua luce con il nastro e hai le tue mosche.Attacca le mosche sulla parte superiore del nastro, tutte nella stessa orientazione, con la testa rivolta verso la direzione da cui porterai l'ago. In questo modo puoi passare direttamente sopra l'ala e assicurarti che, dal momento che volano, non volino via. Se si svegliassero durante la procedura, non vorresti che scappassero.Pertanto, assicurarsi di esercitare una leggera pressione con la punta contro le ali della mosca in corrispondenza della coda. È accettabile se le ali subiscono danni. E quando si rimuovono le mosche per l'iniezione, molto probabilmente perderanno comunque le ali, ma sopravvivranno.Questo può essere utile perché non si rischia di perdere le mosche; quindi applica un olio minerale sul micrometro nella parte posteriore dell'ago, poi l'ago di iniezione polare, e a quel punto è sufficiente regolare la pressione per far risalire il materiale fino alla punta dell'ago. Ho iniettato un volume compreso tra 10 e 15 nanolitri, ma purché sia costante, il risultato va bene. Un dettaglio importante in questo esperimento è che la mosca, una volta iniettata, richiede che l'ago penetri il più possibile nella parte superiore dell'addome.Perché qui, fondamentalmente, quando l'ago penetra, si ha uno spazio più ampio per muoversi su e giù. E sostanzialmente, se è più vicino alla cuticola, è meno probabile che vengano perforati organi vitali durante il volo. È molto improbabile, ad esempio, che si possa fare un buco nell'intestino, cosa che potrebbe uccidere l'insetto su cui si sta eseguendo l'intervento chirurgico.Il mio nome è Voia Friedman. Sono ricercatrice associata presso l'Università di Princeton, nel laboratorio di Eric Hels. Oggi vorrei parlarvi di questo protocollo che avete appena visto, la dimostrazione.Questo protocollo è stato eseguito perché volevamo dimostrare che UBA è in grado di attraversare i tessuti. UBA è uno dei parassiti intracellulari più diffusi sulla faccia della terra e infetta dal 20 al 70% degli insetti e di molte altre specie.Ed è inoltre molto importante in relazione alle malattie umane, poiché infetta nematodi che trasmettono malattie come la cecità fluviale o la loiasi. Inoltre, CCA è un endosimbionte obbligato in questi vermi. Esiste un grande e crescente interesse nell'utilizzare CCA anche come mezzo per controllare le malattie parassitarie trasmesse da zanzare, come la malaria e il dengue.Questo protocollo è stato sviluppato fondamentalmente per dimostrare che, una volta presenti nel cavo addominale di una mosca, le CCA possono attraversare i tessuti e raggiungere la linea germinale. Fondamentalmente, quello che si può osservare qui è l'of dell'ovaio di Drosophila; una volta che le CCA sono presenti nell'emolinfa, possono attraversare la peritonea rosa che circonda l'ovaio.E poi attraversano uno strato muscolare. E in realtà uno dei primi luoghi in cui entrano nell'ovaio è l'immagine delle cellule staminali somatiche. Da qui possono raggiungere la linea germinale.E questo batterio viene trasmesso nello stesso modo in cui vengono trasmesse le mitocondrie, cioè attraverso la madre, attraverso i citoplasmi presenti nell'uovo. Pertanto, devono necessariamente essere presenti nella linea germinale. Per questo motivo è stato sviluppato questo protocollo.E questo protocollo può essere molto utile perché, tradizionalmente, il metodo utilizzato per trasinfettare WbAA consisteva nel prelevare WbAA e introdurlo in una nuova specie di insetto attraverso microiniezioni nell'embrione. Tuttavia, questi metodi sono molto più complessi.E fondamentalmente qui stiamo semplicemente sfruttando la biologia degli o, poiché sono in grado di attraversare i tessuti e raggiungere i tessuti delle cellule staminali, riuscendo a passare fino alla linea germinale. Questo rende più facile ottenere UBA da alcune specie di insetti infetti, e questi possono essere trasmessi a specie non infette. Probabilmente, penso che sia l'iniezione stessa.Fondamentalmente, è necessario prestare attenzione a mobilizzare la mosca nel modo più accurato possibile. Utilizziamo del nastro adesivo doppia faccia e occorre inserire l'ago il più vicino possibile, e il più parallelo possibile, rispetto alla mosca, in modo da non andare troppo in profondità. In questo modo, è meno probabile che la mosca muoia dopo aver eseguito l'intervento chirurgico.

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