Articolo metodologico

Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

DOI:

10.3791/160

⸱

25 febbraio 2007

 , 
1Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

In questo articolo

Sommario

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Isolamento di post-impianto di embrioni allo stadio permette di studiare e analizzare patterning gene cellulari lignaggio processi decisionali durante lo sviluppo embrionale, ma corretta dissezione dell'embrione precoce può essere difficile. Questo protocollo descrive un metodo per isolare primi primitivo-striscia-stadio embrioni (~ 6,5 giorni post coitum [dpc]).

Abstract

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Analisi dei modelli di espressione genica durante le prime fasi di sviluppo embrionale dei mammiferi in grado di fornire importanti indizi circa la funzione del gene, l'interazione cellula-cellula e meccanismi di segnalazione che patterning guida embrionale. Tuttavia, la dissezione dell'embrione mouse dal decidua poco dopo l'impianto può essere un procedimento impegnativo e dettagliato passo-passo la documentazione di questo processo è carente.

Qui mostriamo come post-impianto (6,5 DPC) sono isolate da embrioni prima dissezione nell'utero di un topo gravide (rilevamento del tappo vaginale è stato designato giorni 0,5 coitum poist) e poi sezionare l'embrione da decidua materna. La dissezione della membrana Reichert è descritto così come la rimozione del cono ectoplacental.

Protocollo

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Dissezione di organi riproduttivi di un topo femmina

  1. Animali gravidi sono eutanasia da CO 2 asfissia con gas compresso.
  2. L'animale giaceva supino sul tampone assorbente e immergerlo in etanolo al 70% per ridurre il rischio di contaminare la dissezione con i capelli del mouse.
  3. Pizzicare la pelle e fare una piccola incisione laterale alla linea mediana con regolare forbici chirurgiche. Tenere la pelle saldamente sopra e sotto l'incisione e tirare la pelle a parte verso la testa e la coda per esporre l'addome.
  4. Afferrare il peritoneo con una pinza e taglio per esporre la cavità addominale.
  5. Individuare gli organi....

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Discussione

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Post-impianto nel topo si verifica tra 4,5 dpc e la nascita. Questo metodo può essere applicato dissezione, essenzialmente come descritto, per isolare prima o dopo gli embrioni scena al 5,5-8,5 dpc.

....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Pinze da dissezione microchirurgiche zigrinate, dritteStrumentoRoboz Surgical Instruments Co.RS-51302 paia
Pinzette da dissezione microchirurgiche modello #55 INOXStrumentoRoboz Surgical Instruments Co.RS-50102 paia
Soluzione salina tamponata al fosfato di Dulbecco’s (1x)ReagenteInvitrogen14190
Piatto di Petri sterile in polistirene FisherbrandStrumentoFisher Scientific08-757-12
Paraformaldeide al 4% in PBSReagente
Forbici da dissezione dritte con punta affilataStrumentoFisher Scientific08-940
Topi femmina gravidiAnimale
Microscopio stereoscopicoMicroscopio

Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).
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Dissezione dell embrione di topoisolamento della corna uterinaseparazione del sito di impiantodissezione della membrana di Reichertrimozione del cono ectoplacentalepelatura del tessuto decidualefissazione dell embrione in PFAibridazione in situ su intero campionemarcatori delle cellule germinali BMP4tecnica di microscopio da dissezione

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