Descriviamo un romanzo rosso proteina fluorescente (RFP), giornalista che si esprime in particolare nella Drosophila Occhio. Noi dettaglio una metodologia per la dissezione del disco occhio immaginale e come questo giornalista può essere utilizzato per facilitare la dissezione e l'identificazione di specifici tipi cellulari negli occhi di sviluppo.
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Articolo metodologico
Un Reporter Novel RFP per aiutare nella visualizzazione del Disco Eye immaginale in Drosophila
In questo articolo
Sommario
Protocollo
- Primo posto una goccia di PBS su un piatto Sylgard sotto un microscopio da dissezione.
- Avanti rimuovere diversi larve erranti instar terzo da un flacone o bottiglia con una spatola e metterli in PBS.
- Per iniziare la dissezione usare la pinzetta mano sinistra (se siete di mano destra) di cogliere una larva due terzi del cammino verso la parte posteriore e quindi utilizzare l'altra coppia per tenere la bocca ganci scuro di colore alla fine anteriore.
- Ora estrarre delicatamente la larva a parte muovendo entrambe le coppie di pinzette distanza gli uni dagli altri. L'apparato boccale dovrebbe venire via dal resto del corpo con l'occhio / cervello co....
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Discussione
Dissezione del disco occhio Drosophila immaginale è semplice, ma può richiedere tempo per padroneggiare. I passi fondamentali sono l'identificazione del disco occhio e la sua dissezione lontano dal cervello larvale. L'identificazione del disco occhio è reso più facile con l'occhio-RFP linea descritta qui. Eventuali modifiche devono rimuovere il disco antennali o la membrana peripodial, o di lasciare il lobo ottico collegato a visualizzare gli assoni PR entrare nel cervello.
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato dal re College di Londra e la Royal Society.
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Riferimenti
- Doroquez, D. B., Rebay, I. Crit Rev Biochem Mol Biol. 41 (6), 339-339 (2006).
- Kaul, A. K., Craig, G. M., McNeill, H., Bateman, J. M. , Forthcoming.
- Barolo, S., Castro, B., Posakony, J. W. Biotechniques. 36 (3), 436-436 (2004).
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Ristampe e permessi
