Questo articolo illustra la floreali-dip metodo di Agrobacterium tumefaciens-Mediata trasformazione del Arabidopsis thaliana. Con l'introduzione di un ciclo cellulare regolata promotore-reporter, PTSO2:: β-glucuronidasi (GUS), In Arabidopsis, Ci illustra come si rileva giornalista espressione GUS in piantine transgeniche.
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Articolo metodologico
Floreale-dip Trasformazione Arabidopsis thaliana Per esaminare PTSO2:: β-glucuronidasi Reporter espressione genica
In questo articolo
Sommario
Abstract
La possibilità di introdurre geni estranei in un organismo è il fondamento della biologia moderna e le biotecnologie. Nella pianta fiorita modello
Protocollo
I. floreale-dip trasformazione di Arabidopsis thaliana
- Circa 1 mese prima trasformazione, seminare i semi di Arabidopsis sul 4-8 pentole (5 vasi pollice quadrato), con circa 10-15 piante per vaso. Per gli impianti con la fertilità normale, 4 vasi di piante per costruire plasmide sarà sufficiente. Se uno ha a trasformare Arabidopsis mutante con riduzione della fertilità, aumentare il numero di vasi di conseguenza.
- Le piante sono coltivate in condizioni standard (16 ore di luce e 8 ore al buio a 22 ° C). Se le piante sono coltivate in brevi giorno o abbassare la temperatura, che richiederà più tempo a fiorire e più tempo ....
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Discussione
L'efficienza di trasformazione è determinato da molti fattori diversi, che sono discussi di seguito:
- La salute delle piante e la loro età sono di primaria importanza. Circa un mese impianti di produzione di numerose gemme floreali immaturi sono l'ideale. Taglio fuori spara primario di incoraggiare secondaria giornate di formazione sparare 3-4 prima della trasformazione aumenterà l'efficienza della trasformazione. Vecchi impianti darà origine a trasformanti ma ad un tasso inferiore.
- Fer.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Ringraziamo Chunxin Wang per la costruzione di pTSO2:: GUS e per le foto in figura 1, Detlef Weigel per la condivisione del GUS-infallibile protocollo, Paja Sijacic, e Courtney Hollender per gli utili commenti. La ricerca in laboratorio, Z. L s è supportato dal US National Science Foundation (IOB0616096 e MCB0744752). ZL è parzialmente supportata dalla University of Maryland Stazione esperimento agricola.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 6-benziladenina | Sigma-Aldrich | 852430 | |
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Tossico, indossare guanti | |
| Mezzo basale di Murashige e Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5519 | |
| Soluzione vitaminica di Gamborg’s 1000X | Sigma-Aldrich | G1019 | |
| X-Gluc (sale di cicloesilammina del 5-bromo-4-cloro-3-indolil β-D-glucuronide) | Biosynth International, Inc | B-7300 | Tossico, sensibile alla luce, conservare al buio |
| Nastro Micropore 3M | Fisher Scientific | 19027761 |
Riferimenti
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J....
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Ristampe e permessi
