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1.Impostazione del Campo Magnetico con la Manipolazione del Campo Magnetico Unidimensionale
- Accendere l'unità di alimentazione (Figura 1A).
- Posizionare il tunnel a spirale nel luogo in cui verrà eseguito il protocollo reotattico (sezione 3) ma tenerlo scollegato dall'apparecchio natatorio (Figura 1A). Posizionare una sonda magnetica collegata con un Gauss/Teslameter all'interno del tunnel e verificare quale tensione è necessaria per ottenere il valore del campo magnetico scelto lungo l'asse maggiore del tunnel.
NOTA: A causa delle proprietà magnetiche di un solenoide, il campo è ragionevolmente uniforme all'interno del tunnel; Questo può essere verificato muovendo lentamente la sonda sia orizzontalmente che verticalmente.
- Scollegare la sonda e collegare il tunnel di flusso all'apparecchio per il nuoto.
- Inizia con il protocollo reotattico (sezione 3).
2. Impostazione del campo magnetico con la manipolazione tridimensionale del campo magnetico
- Attivare i driver della CPU, del DAC e della bobina (Figura 1B).
- Impostare il campo magnetico scelto su ciascuno dei tre assi (x, y e z).
- Posiziona il tunnel al centro del set di coppie di Helmholtz.
- Inizia con il protocollo reotattico (sezione 3).
3. Test della reotassi del pesce zebra nella camera di flusso
- Trasferire da uno a cinque pesci nel tunnel di flusso utilizzando una vasca da 2 L con i lati e il fondo oscurati.
- Accendere la pompa e impostare la portata nel tunnel a 1,7 cm/s.
nota: Quest'acqua che si muove lentamente manterrà ossigenata l'acqua nel tunnel e faciliterà il recupero degli animali.
- Lascia che gli animali si acclimatino al tunnel di nuoto per 1 ora.
- Avvia la registrazione video del comportamento dei pesci nel tunnel.
nota: Abbiamo utilizzato una fotocamera (ad esempio, Yi 4K Action) con telecomando (ad esempio, Bluetooth) e salvato il video come .mpg (30 fotogrammi/s).
- Iniziare l'aumento graduale della portata secondo il protocollo sperimentale scelto (1.3 cm/s in questo studio; Figura 2).
NOTA: Per questo protocollo, abbiamo utilizzato basse portate che, per il pesce zebra, vanno da 0 a 2,8 BL (lunghezze del corpo)/s. Queste velocità di flusso si collocano nell'intervallo inferiore delle portate che inducono il nuoto orientato continuo nel pesce zebra (3%-15% della velocità di nuoto critica [Ucrit]). L'utilizzo di basse portate (seguendo il protocollo di Brett) è legato alle specifiche caratteristiche comportamentali di questa specie in presenza di correnti d'acqua. I pesci zebra tendono a nuotare lungo l'asse maggiore della camera, girandosi frequentemente, anche in presenza di flusso d'acqua, e tendono a nuotare sia a monte che a valle. Questo comportamento è influenzato dalla portata d'acqua, che scompare a velocità relativamente elevate (>8 BL/s), quando gli animali nuotano continuamente rivolti verso monte (piena risposta reotattica positiva). Gli spostamenti verticali e trasversali sono molto rari.
- Eseguire la morfometria degli animali (sesso e lunghezza totale [TL], lunghezza della forchetta [FL] o BL) su immagini di pesci in una camera morfometrica.
- Selezionare l'immagine appropriata.
- Aprire l'immagine in ImageJ.
- Prendi nota del sesso dell'animale (i maschi di pesce zebra sono snelli e tendono ad essere giallastri, mentre le femmine sono più arrotondate e tendono ad avere colorazioni blu e bianche).
- Fare clic su Analizza > Imposta scala e impostare la scala dell'immagine in centimetri, utilizzando l'intera lunghezza orizzontale del tunnel come riferimento.
- Fare clic su Analizza > Misura e registrare la lunghezza lineare dell'animale.
- Calcola il suo peso corporeo (BW).
nota: BW è calcolato dalle relazioni sesso-FL-BW precedentemente costruite in laboratorio o dai metadati. L'intera procedura evita lo stress da manipolazione sugli animali.
