Test delle preferenze luce-buio: un metodo per studiare il comportamento correlato all'ansia nel pesce zebra

Abstract

Fonte: Holcombe, A., et al. Un nuovo metodo di somministrazione di farmaci a più pesci zebra (Danio rerio) e la quantificazione dell'astinenza. J. Vis. Exp.(2014)

Il video descrive il test di preferenza luce-buio per studiare il comportamento correlato all'ansia nel pesce zebra dopo l'esposizione all'etanolo.

Protocol

1. Test comportamentali

1. Procurati un'arena chiaro/scuro di 9,5 cm di larghezza per 55 cm di lunghezza e 9,5 cm di profondità con un pavimento bianco impermeabile (Figura 1B). Applicare carta antiriflesso impermeabile bianca e nera alle pareti interne dell'arena utilizzando il velcro, con metà dell'arena coperta in bianco e metà ricoperta in nero. Riempi l'arena fino a una profondità di 5 cm con acqua dell'habitat a una temperatura di 25-28 °C. Mantieni questa temperatura durante i test.
2. Riduci al minimo gli stimoli visivi esterni costruendo un recinto bianco su tre lati in cui posizionare l'arena. Assicurarsi che l'area di test abbia un'illuminazione diffusa dall'alto che non causi riflessi sulla superficie dell'acqua, ma sia sufficientemente luminosa per il software di tracciamento del movimento o per la quantificazione manuale post-hoc dalle immagini video.
3. Posiziona l'arena nell'involucro e imposta i parametri di registrazione e analisi del movimento del software di tracciamento del comportamento. Imposta la durata della prova su 5-15 minuti, a seconda della domanda di ricerca.
   NOTA: Qui, abbiamo usato 5 min.
4. Trasporta il gruppo di pesci da testare nell'area di ricerca nella vasca dell'habitat e posizionali all'esterno del recinto dell'arena. Acclimatare il pesce per 10 minuti.
5. Cattura delicatamente un pesce del gruppo appropriato e posizionalo al centro dell'arena chiara/scura, assicurandoti di rilasciare il pesce quando è posizionato parallelamente all'asse lungo dell'arena per evitare di inclinare il pesce verso la zona chiara o scura.
6. Inizia a registrare il comportamento subito dopo che l'animale è stato rilasciato. Fai attenzione a eventuali problemi software con il tracciamento del pesce o al salto o al congelamento dei pesci. Ruotare l'arena di 180° dopo che metà dei soggetti è stata testata per evitare confusioni dovute a distorsioni derivanti da quale estremità dell'arena è orientata verso l'estremità aperta del recinto.
7. Al termine della prova, rete delicatamente e rimuovi il pesce dall'arena in una vasca di contenimento o in una vasca di isolamento.

2. Analisi

1. Esamina il tempo trascorso nelle zone chiare rispetto a quelle scure. Per ogni gruppo e per ogni pesce, ottenere il tempo relativo trascorso nelle zone chiare e scure e analizzare utilizzando un t-test a campione (o test di rango con segno di Wilcoxon per dati non parametrici; differenza da (metà del tempo totale di prova) 150 secondi) per determinare se i gruppi preferiscono significativamente un'area rispetto all'altra.
2. Per confrontare le preferenze, calcolare un indice di preferenza sottraendo il tempo trascorso nella zona chiara dal tempo trascorso nella zona scura e confrontare le differenze tra i gruppi. I test t possono essere utilizzati per confrontare due gruppi. Confronta più gruppi con un'analisi unidirezionale della varianza utilizzando il test post hoc HSD di Tukey ove necessario (o il test di Kruskal-Wallis con il test post hoc di confronto multiplo di Dunn per dati non parametrici).
3. Confronta la velocità, il numero di transizioni di zona, i meandri e l'immobilità tra i gruppi. Utilizzare l'analisi unidirezionale della varianza utilizzando il test post hoc HSD di Tukey ove necessario (o il test di Kruskal-Wallis con il test post hoc di confronto multiplo di Dunn per dati non parametrici).

Results

Figura 1: Procedura di trasferimento e arena Luce/Oscurità. Queste foto illustrano la procedura di trasferimento. (A) Innanzitutto, i pesci si trovano nella vasca di trasferimento (a sinistra). Il serbatoio di dosaggio contenente etanolo è raffigurato (a destra). (B-C) Lo spostamento del pesce dal serbatoio di trasferimento alla soluzione di etanolo richiede al ricercatore di sollevare l...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Arena Chiara/Oscura	costume		Costruire secondo la descrizione della procedura. 9,5 cm di larghezza, 9,5 cm di profondità, 55 cm di lunghezza.
Sistema di alloggiamento da banco a tre ripiani	Habitat acquatici	N/A
Vasca di deposizione delle uova da 1,5 L con deflettore da 400 μm	Habitat acquatici	N/A
Software di tracciamento del movimento Ethovision XT	Tecnologia dell'informazione Noldus
Etanolo per cereali puri	Luxco, INC	N/A