Saggio di evitamento e tigmotassi del pesce zebra: un metodo ad alto rendimento per esaminare il comportamento larvale in risposta a uno stimolo visivo avversivo

In questo articolo

Abstract

Fonte: Richendrfer, H., et al. Analisi comportamentali automatizzate ad alto rendimento nelle larve di pesce zebra. J. Vis. Exp.(2013)

Il video descrive l'evitamento e il test della tigmotassi delle larve di pesce zebra. Il video esamina il comportamento delle larve di pesce zebra in risposta a uno stimolo visivo avversivo.

Protocollo

1. Acquisizione immagine

In ogni corsia delle piastre possono essere posizionate fino a 20 larve. In genere vengono utilizzate 5 larve per corsia per facilitare il monitoraggio più accurato della velocità di nuoto e per ridurre il numero di larve necessarie per esperimento. Le corsie possono essere riempite con acqua d'uovo con o senza farmaci o sostanze tossiche a seconda dell'esperimento. Tuttavia, le corsie non devono essere riempite completamente fino a quando non vengono posizionate negli armadi di imaging; Ciò eviterà il trabocco. Per coerenza, le larve dovrebbero avere un periodo di acclimatazione di dieci minuti dopo essere state poste negli stampi di agarosio e posizionate sopra lo schermo del laptop. Spostare in modo efficiente le larve dalla capsula di Petri alla corsia dell'agarosio aiuterà a ridurre lo stress delle larve. Questo è più facile quando le larve sono alloggiate in vasche poco profonde o piastre di Petri.
Gli armadi di imaging includono una fotocamera digitale Canon utilizzata per la fotografia time-lapse e un laptop. La fotocamera deve essere posizionata nella parte superiore dell'armadio e puntata verso la parte inferiore dell'armadio, dove deve essere posizionato un laptop con schermo da 15,6 pollici con lo schermo rivolto verso l'alto (Figura 1). Quattro piastre devono essere posizionate a mano direttamente sopra lo schermo del laptop. A questo punto le corsie possono essere rabboccate con acqua d'uovo o trattamento chimico in modo che sia a livello della parte superiore della corsia (per eliminare le ombre sui bordi delle corsie nelle immagini).
Una presentazione PowerPoint viene utilizzata come stimolo avversivo per le larve. In passato, le sfere rosse in movimento venivano mostrate alle larve di zebrafish in 6 o 12 piastre a più pozzetti. Il PowerPoint corrente inizia con uno sfondo bianco vuoto per 15 minuti, seguito da 15 minuti di una barra rossa in movimento sulla metà superiore della lastra (Figura 2). Per eliminare il surriscaldamento delle larve, è meglio acquistare un laptop con una temperatura dello schermo che non superi i 28 °C. Per evitare l'evaporazione del liquido all'interno delle corsie di agarosio, il tempo massimo di imaging deve essere mantenuto al di sotto di un'ora.
La fotocamera digitale deve essere programmata per la fotografia time-lapse, scattando foto ogni 6 secondi per un totale di 300 immagini per esperimento. Tuttavia, la frequenza e la lunghezza possono essere regolate a seconda dell'esperimento e della quantificazione comportamentale. In passato, i tempi di imaging prolungati venivano utilizzati utilizzando intervalli più lunghi tra ogni immagine. La fotocamera può essere impostata su una risoluzione inferiore per l'imaging a velocità video (30 fotogrammi al secondo). Mentre la risoluzione inferiore limita le registrazioni a una singola piastra multipozzetto, le registrazioni video sono appropriate per l'imaging di eventi di nuoto rapido.

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Risultati

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Figura 1. Cabine di imaging. Le cappe di imaging sono state costruite appositamente nel nostro laboratorio e utilizzate per analisi comportamentali ad alto rendimento. Una fotocamera digitale da 15 megapixel è stata fissata alla parte superiore dell'armadio rivolta verso il basso per raccogliere immagini in time lapse delle larve in piastre multilinea posizionate sopra lo schermo di un computer portatile. Tra le lastre e...