Screening della tossicità chimica basata sugli embrioni: valutazione degli effetti sullo sviluppo di embrioni di zebrafish

Abstract

Fonte: Hao J. et al., Schermo in vivo per piccole molecole basato su pesce zebra su larga scala. J. Vis. Exp. (2010)

In questo articolo, gli embrioni di zebrafish vengono utilizzati per lo screening della tossicità chimica. La tossicità chimica è correlata alle letture del fenotipo. Il protocollo del campione mostra un approccio metodologico per l'esecuzione dello screening della tossicità chimica.

Protocol

1. Trasferimento della libreria di piccole molecole

Sebbene il trasferimento di composti possa essere automatizzato con metodi di trasferimento robotico, descriveremo il metodo di trasferimento manuale.

1. Le librerie di piccole molecole sono generalmente fornite in un formato a 96 pozzetti, con ogni composto memorizzato in DMSO come stock da 10 mM. Circa 60 minuti prima che gli embrioni raggiungano la fase in cui devono essere aggiunti i composti, scongelare un numero desiderato di piastre da 96 pozzetti contenenti aliquote di piccole molecole (piastra sorgente). Prendere nota del numero di serie o di altro numero....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Libreria di piccole molecole di composti strutturalmente diversi disposti in un formato 96-wll a 10 mM stock in DMSO. Ogni piastra master viene aliquotata in piastre di stoccaggio in polipropilene a 96 pozzetti (Corning) e conservata a -80°C fino a usare.
Drierite	W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH
Pipette a 12 canali, 2-20 μL	Eppendorf
Nastro sigillante in alluminio per piastre a 96 pozzetti	Nunc, Rochester, NY
Dmso	Sigma, St. Louis, MO
Incubatore di base, 28,5°C	Fisher Scientifico
Piastre per saggi a fondo tondo a 96 pozzetti in polistirene	Corning COSTAR; Lowell, MA
Stereomicroscopio con base a luce trasmessa	Leica Microsystems, Bannockburn, IL
Terreno embrionale E3: 5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4 , contenente lo 0,003% di PTU (feniltiocarbamide, Sigma; St. Louis, MO).			La PTU può essere preparata come soluzione 10x sciogliendo 0,3 g di PTU in 1 L di terreno embrionale E3. Le soluzioni contenenti PTU devono essere protette dalla luce coprendole con un foglio di alluminio.