Estrazione del DNA dalla clip della coda: un metodo utilizzato nella genotipizzazione del pesce zebra

Abstract

Fonte: Xing L., et al. Genotipizzazione rapida ed efficiente del pesce zebra utilizzando la PCR con analisi del fuso ad alta risoluzione. J. Vis. Exp. (2014).

Questo articolo descrive l'estrazione del DNA dalla clip della coda del pesce zebra. Il protocollo dimostra un metodo rapido ed efficiente per analizzare i genotipi del pesce zebra.

Protocollo

1. Preparazione del DNA

1. Preparare il tampone per la lisi del DNA: 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl pH 8,3, 0,3% Tween 20, 0,3% NP40. Aggiungere la proteinasi K fresca a una concentrazione finale di 1 mg/ml il giorno dell'uso.
2. Raccolta dei tessuti:
   1. Per la clip a pinna di pesce adulto:
      1. Anestetizzare il pesce: Mettere il pesce in una soluzione di MS-222 (tricaina) allo 0,004%. Aspetta che il movimento delle branchie rallenti.
      2. Metti il pesce su una pila di 5-10 Kimwipes e taglia un pezzettino della pinna caudale, circa 2-3 mm, con una lametta sterile.
      3. Posizionare rapidamente il pesce in una vasca etichettata....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
100 Reaction LightScanner Master Mix	BioFire	HRLS-ASY-0002	www.biofiredx.com
Tricaina
Paraformaldeide