Montaggio dell'agar: un metodo di base per montare embrioni vivi di pesce zebra per l'imaging a lungo termine

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Hagedorn E. J., et al. Generazione di embrioni parabiotici di zebrafish mediante fusione chirurgica di blastule in via di sviluppo. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video descrive passo dopo passo le istruzioni su come montare embrioni vivi di zebrafish su una piastra a 6 pozzetti utilizzando agarosio a basso punto di fusione. Fornisce inoltre il processo per acquisire immagini di embrioni vivi e analizzarle utilizzando un software.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Configurazione del microscopio, acquisizione, elaborazione e analisi delle immagini

Preparare l'agarosio allo 0,8% a basso punto di fusione (LMP): aggiungere 0,8 g di agarosio LMP a 100 ml di E3 e scaldare fino a completa dissoluzione. A caldo, aliquotare 1 ml di agarosio LMP in provette per microfugi da 1,5 ml in un blocco riscaldante a 37 °C. L'agarosio LMP rimarrà fuso a 37 °C. Aggiungere 40 μl di tricaina a 4 mg/ml (25x), pH 7,0 a ciascuna aliquota di 1 ml di agarosio LMP a 37 °C. NOTA: Se si lavora con un ceppo pigmentato, aggiungere 20 μl di PTU allo 0,15% (50x) a ciascuna aliquota da 1 ml.
1. Conservare ....

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Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

Comments

Agarosio LMP (Agarosio LMP ultrapuro)

Invitrogen

16520100

Tricaina (polvere) (Tricaina Metanosulfonato, Tricaina-S)

Chimica occidentale Inc

MS 222

Piastre a 6 pozzetti con fondo in vetro utilizzate per l'imaging

MatTek

P06G1.5-20-F

Pompa per pipette da 10 ml (verde) (Pipetta per pipetta)

Novatech Internazionale

F37898-0000

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