Assotomia laser a due fotoni: un metodo per ferire gli assoni negli embrioni di zebrafish e osservare il recupero assonale

Abstract

Fonte: O'Brien G. S., et al. Assotomia a due fotoni e imaging confocale time-lapse in embrioni vivi di zebrafish. J. Vis. Exp. (2009).

Questo video descrive il metodo per ferire gli assoni negli embrioni di zebrafish utilizzando l'assotomia laser a due fotoni e osservando il recupero assonale da una lesione.

Protocollo

1: Assotomia a due fotoni utilizzando un microscopio a due fotoni costruito su misura con un laser Chameleon Ti-Sapphire

1. Preparati per l'imaging. Posizionare l'embrione o gli embrioni montati su un supporto per vetrini sotto il microscopio. Concentrati su un embrione con un obiettivo d'acqua 40X (0,8 NA). Accendi il laser. Siamo stati in grado di visualizzare e danneggiare in modo riproducibile i neuroni che esprimono GFP utilizzando i seguenti parametri. Per visualizzare gli assoni a una potenza non dannosa, impostare il laser su una lunghezza d'onda di 910 nanometri (nm) e una potenza di 30 milliwatt (mW elencati sono la quantità di potenza al campione).....