in vivo Elettroporazione: un metodo sito-specifico per trasfettare il pesce zebra

In questo articolo

Abstract

Fonte: Durovic, T., et al. Metodo di elettroporazione per la consegna in vivo di DNA plasmidico nel telencefalo adulto di pesce zebra. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive l'elettroporazione in vivo, che è una tecnica per la consegna del DNA nelle cellule ependimogliali in zebrafish adulti.

Protocollo

1. Elettroporazione

Rimuovere il pesce dalla configurazione di iniezione tenendolo ancora nella spugna.
Immergere il lato interno della punta degli elettrodi nel gel per ultrasuoni.
Copri il telencefalo di pesce con una piccola quantità di gel per ultrasuoni.
Posizionare la testa del pesce tra gli elettrodi, posizionando l'elettrodo positivo sul lato ventrale della testa del pesce e l'elettrodo negativo sul lato dorsale (Figura 1C), tenendo ancora il corpo del pesce nella spugna. Questo imposta la direzione del flusso della corrente necessaria per elettroporare le ependimoglia posizionate nella zona subventricolare.
Premere delicatamente e con precisione gli elettrodi contro il telencefalo (Figura 1 C). Somministrare la corrente con il pedale. Tenere gli elettrodi in posizione fino al termine di tutti e cinque gli impulsi.

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Risultati

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Figura 1: Rappresentazione schematica della sezione coronale del telencefalo estroflesso del pesce zebra. (A) Schema di una sezione coronale del telencefalo del pesce zebra, evidenziando la posizione delle cellule ependimogliali, che rivestono la superficie ventricolare e costruiscono la parete ventricolare ventrale. Lo strato ependimale dorsale collega i due emisferi e copre il ventricolo (V), situato t...