1. Infezione sperimentale da M. marinum con iniezione intraperitoneale
<ol>
	<li>Pipettare una goccia da 5 μl della soluzione batterica diluita su un pezzo di pellicola di parafilm e tirare la gocciolina in un ago da insulina da 30 G.</li>
	<li>Per l'esperimento, utilizzare pesci selvatici di 5-8 mesi e pesci mutanti rag1-/-hu1999. Anestetizzare il pesce zebra adulto nell'acqua della vasca con estere etilico dell'acido 3-amminobenzoico allo 0,02% (pH 7,0). Posizionare il pesce con il lato ventrale rivolto verso l'alto in una fessura su una plastica espansa umida. 
	NOTA: I pesci straccioni mutanti non sono in grado di subire ricombinazione somatica e produrre cellule T e B funzionali.</li>
	<li>Iniettare l'ago tra le pinne pelviche con un angolo di circa 45°. Tenere l'apertura dell'ago verso l'alto per osservare che l'intera apertura si trova all'interno della cavità addominale. Iniettare lentamente la sospensione batterica e rimuovere con cautela l'ago. 
	nota: Nel caso in cui il tracciante rosso fuoriesca dal pesce al momento dell'iniezione, escludere il pesce dall'esperimento.</li>
	<li>Subito dopo l'iniezione, trasferire il pesce in una vasca di recupero con acqua fresca.</li>
	<li>Prelevare campioni della sospensione batterica su piastre 7H10 ogni 15 minuti dall'aliquota batterica in uso e incubare i batteri a 29 °C per 5 giorni e verificare la dose di infezione contando le colonie sulle piastre.</li>
	<li>Controllare regolarmente il benessere dei pesci e sopprimere tutti i pesci con sintomi dell'infezione con una concentrazione superiore allo 0,02% di estere etilico dell'acido 3-aminobenzoico (pH 7,0). 
	nota: Approssimativamente, il 7% degli zebrafish adulti infettati con 34 ± 15 CFU e il 30% degli zebrafish infettati con 2029 ± 709 CFU avranno avuto sintomi entro 8 settimane. I sintomi possono includere nuoto anomalo, mancanza di risposta al tatto, respiro affannoso, edema o deperimento osservabile.</li>
	<li>Mantenere il pesce zebra secondo gli standard comuni.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mycobacterium marinum </td>
			<td>Collezione di cultura dei tipi americani </td>
			<td>ATCC 927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosso fenolo</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compresse saline tamponate con fosfato (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417-50SCHEDA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Middlebrock 7H10 agar</td>
			<td>BD, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11799042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estere etilico dell'acido 3-aminobenzoico (pH 7,0)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Codice: A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican 100 Ago da insulina da 30 G</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9151133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Siringa da 1 ml</td>
			<td>Henke Lupo Sass</td>
			<td>4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

iniezione intraperitoneale: un metodo di somministrazione della soluzione nella cavità addominale di un pesce zebra adulto

Fonte: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Modellazione della tubercolosi nel pesce zebra adulto infetto da Mycobacterium marinum</a>. J. Vis. Exp. (2018).
Questo video descrive una tecnica di iniezione intraperitoneale, un metodo per somministrare soluzioni nella cavità addominale di un pesce zebra adulto.

Iniezione intraperitoneale: un metodo di somministrazione della soluzione nella cavità addominale di un pesce zebra adulto

Fonte: Luukinen, H., et al. Modellazione della tubercolosi nel pesce zebra adulto infetto da Mycobacterium marinum.  J. Vis. Exp. (2018).
Questo video descrive un ...

- Digiunare un pesce adulto per 24 ore prima dell'iniezione per svuotare il tratto gastrointestinale e creare ulteriore spazio nell'addome. Il giorno della procedura, anestetizzare il pesce con tricaina e metterlo in una fessura in una spugna bagnata con il lato ventrale rivolto verso l'alto.
Quindi, pipettare la quantità desiderata di soluzione iniettabile su un pezzo di pellicola da laboratorio e inserirla in un ago da insulina. Posizionare l'ago tra le pinne pelviche a un angolo di 45 gradi rispetto all'asse antero-posteriore del corpo e spingerlo delicatamente verso l'interno sulla linea mediana. Far avanzare l'ago di circa 1 o 2 millimetri nella cavità addominale, lo spazio tra la parete addominale e gli organi interni, e iniettare lentamente la soluzione di interesse. Attendere cinque secondi prima di estrarre l'ago per evitare fuoriuscite. Ora, rimuovi con cura l'ago.
Dopo l'iniezione, trasferire rapidamente il pesce in una vasca di recupero contenente acqua fresca della vasca. Se il pesce non inizia a nuotare immediatamente, fai roteare l'acqua vicino alle branchie per aiutarlo a riprendersi dall'anestesia. Nel protocollo di esempio, inietteremo una soluzione di mycobacterium marinum in un pesce mutante RAG1 per studiare l'infezione.
- Per prima cosa, versare una gocciolina da 5 microlitri della soluzione batterica diluita su un pezzo di pellicola di paraffina. Quindi, tirare la gocciolina in un ago da insulina calibro 30. Usa un pesce di età compresa tra cinque e otto mesi per questo esperimento, uno dei quali è un pesce di tipo selvatico e l'altro è un pesce mutante RAG.
Posiziona questi pesci con il lato ventrale rivolto verso l'alto nelle fessure di un pezzo di plastica espansa umida. Iniettare l'ago da insulina tra le pinne pelviche con un angolo di 45 gradi. Tenere l'apertura dell'ago verso l'alto per assicurarsi che l'intera apertura sia all'interno della cavità addominale. Quindi, iniettare lentamente la soluzione batterica. Dopodiché, rimuovere con cura l'ago e trasferire immediatamente il pesce in una vasca di recupero riempita con acqua fresca della vasca.
Prelevare campioni dall'aliquota batterica in uso ogni 15 minuti su piastre 7H10. Incubare questi campioni a 29 gradi Celsius per cinque giorni per verificare la dose di infezione. Controlla regolarmente il benessere dei pesci, assicurandoti di sopprimere tutti i pesci con sintomi di infezione incubandoli in acqua con più dello 0,02% di estere etilico dell'acido 3-amminobenzoico.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Danio rerio (zebrafish)

Adult

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

8.3K Views. - Digiunare un pesce adulto per 24 ore prima dell'iniezione per svuotare il tratto gastrointestinale e creare ulteriore spazio nell'addome. Il giorno della procedura, anestetizzare il pesce con tricaina e metterlo in una fessura in una spugna bagnata con il lato ventrale rivolto verso l'alto. Quindi, pipettare la quantità desiderata di soluzione iniettabile su un pezzo di pellicola da laboratorio e inserirla in un ago da insulina. Posizionare l'ago tra le pinne pelviche a un angolo di...

Iniezione intraperitoneale: un metodo di somministrazione della soluzione nella cavità addominale di un pesce zebra adulto

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Name	Company	Catalog Number
Mycobacterium marinum	Collezione di cultura dei tipi americani	ATCC 927
Rosso fenolo	Sigma-Aldrich	P3532
Compresse saline tamponate con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50SCHEDA
Middlebrock 7H10 agar	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
Estere etilico dell'acido 3-aminobenzoico (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	Codice: A5040
Omnican 100 Ago da insulina da 30 G	Braun	9151133
Siringa da 1 ml	Henke Lupo Sass	4010.200V0