Modello di cardiomiopatia del pesce zebra: cardiotossicità indotta da farmaci

Abstract

Fonte: Ma X., et. Un modello di cardiomiopatia indotta da doxorubicina in zebrafish adulto. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive la tecnica di creazione di un modello di cardiomiopatia zebrafish con variazioni minime tra i gruppi sperimentali e nel campione, creiamo un modello di cardiomiopatia zebrafish utilizzando il farmaco doxorubicina.

Protocollo

1. Iniezione di DOX nei pesci adulti

1. Posizionare una capsula di Petri da 100 mm pulita con una spugna al suo interno, sotto un microscopio da dissezione, quindi regolare la messa a fuoco. Tagliate il pan di spagna in modo da creare una cavità di circa 4 cm di lunghezza per contenere un pesce. Crea una cavità più lunga per un pesce più grande.
2. Preparare un ago da 34 G con una micro-siringa da 10 μL. Sciacquare l'ago con 1 tampone HBSS per rimuovere eventuali bolle e blocchi dalla siringa e dal tubo.
3. Anestetizzare il pesce adulto in acqua embrionale contenente 0,16 mg/mL di tricaina per 2 min.
   NOTA: L'anestesia prolungata per oltre 5 minuti seguita da iniezione di DOX può facilmente causare la morte dei pesci.
4. Immergere la spugna in acqua embrionale con tricaina e trasferire il pesce sulla spugna per l'iniezione.
5. Eseguire l'iniezione IP DOX con uno dei due metodi descritti di seguito.
   1. Iniezione IP classica
      1. Posizionare il pesce con l'addome rivolto verso l'alto nella cavità della spugna. Inserire rapidamente l'ago, con un angolo di 45° rispetto al corpo del pesce, nella linea mediana tra le pinne pelviche, e penetrare di circa 1-2 mm. Rilasciare lentamente tutta la soluzione DOX. Attendere 5 s prima di estrarre l'ago. Controllare l'erogazione di DOX da un colore rosso visibile nella pancia del pesce.
   2. Iniezione IP alternativa
      1. Posizionare il pesce lateralmente sulla spugna con la parte anteriore a destra. Stabilizzare delicatamente il pesce usando una pinza smussata con la mano sinistra e tenere la micro-siringa con la mano destra.
      2. Posizionare l'ago sotto la linea laterale sopra la pinna pelvica, con lo smusso rivolto verso l'alto. Puntando verso la posizione delle 7 con un angolo di 45°, inserire l'ago di 3-4 mm nella cavità del pesce situata tra la pinna pelvica e quella anale, quindi premere lentamente lo stantuffo. Controllare l'erogazione di DOX da un colore rosso visibile nella pancia del pesce.
6. Trasferire rapidamente il pesce iniettato in una vasca di attraversamento pulita riempita con acqua fresca del sistema per consentire al pesce di riprendersi. Sciacquare l'ago una volta con 1x tampone HBSS tra un'iniezione e l'altra.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Vasca di attraversamento	Acquaree	ZHCT100	Allevamento ittico
Doxorubicina cloridrato	sigma	D1515-10MG
Soluzione salina bilanciata di Hank (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Veicolo per DOX
Piastra di Petri da 100 mm	Falcone	431741
Micro-siringa NanoFil da 10 μl	WPI	NANOFIL	Per iniezione
Ago calibro 34	WPI	NF34BV-2	Per iniezione
Tricaina	argento		Anestetizzante del pesce