zPDX-Analisi dell'invasività: studio del comportamento invasivo delle cellule tumorali metastatiche negli xenotrapianti di embrioni di zebrafish

Abstract

Fonte: Ren, J. et al. Comportamento invasivo delle cellule del cancro al seno umano nel pesce zebra embrionale. J. Vis. Exp. (2017).

Questo video descrive un metodo di microiniezione per la consegna di cellule di cancro al seno nello spazio perivitellino di embrioni di pesce zebra transgenico. Dopo l'incubazione, visualizziamo l'embrione al microscopio a fluorescenza per osservare l'invasione, la disseminazione e la metastasi delle cellule tumorali.

Protocollo

1. Immagine e analisi del processo metastatico

1. Raccogli diversi embrioni anestetizzati con una pipetta Pasteur a punta larga e trasferiscili sul fondo di vetro di una capsula di polistirolo.
2. Eliminate l'acqua in eccesso e conservate una quantità limitata di acqua d'uovo. Manipola l'embrione in posizione con uno strumento ad anello per capelli e posiziona un coperchio sopra il vetro.
3. Utilizzare un microscopio confocale invertito in combinazione con obiettivi a immersione in acqua o a secco a lunga distanza. Posizionare l'embrione in modo che la regione di interesse sia il più vicino possibile all'obiettivo.
4. Ese....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Pipetta Pasteur a punta larga (0,5-20 μl)	Eppendorf	F276456I
Microscopio confocale	Leica	SP5 STED
Stereomicroscopio	Leica	MZ16FA
Ceppo di pesce zebra Tg (fli:EGFP)			Gentilmente fornito dalla Dott.ssa Ewa Snaar Jagalska (Istituto di Biologia, Università di Leida, Leida, Paesi Bassi)
Piatto in polistirolo con fondo in vetro	WillCo	GWST-5040
Stereomicroscopio fluorescente	Leica	M165 FC
Tricaina (acido 3-amminobenzoico)	SigmaAldrich	A-5040