Attecchimento dell'adenocarcinoma: un metodo per impiantare cellule tumorali nei polmoni murini

Abstract

Fonte: Stevens, L.E. et al, Pre-condizionamento delle vie aeree dei topi con bleomicina aumenta l'efficienza dell'attecchimento ortotopico delle cellule di cancro del polmone. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive un metodo per attecchire cellule di adenocarcinoma polmonare nei polmoni murini precondizionando le vie aeree con l'agente che induce la fibrosi-bleomicina. Questo metodo migliora significativamente l'attecchimento ortotopico delle cellule tumorali del polmone nei polmoni murini

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Trattamento con bleomicina

1. Pianificare l'iniezione di bleomicina nei topi per via intratracheale 14 giorni prima dell'attecchimento delle cellule tumorali.
2. Scongelare il brodo di bleomicina con ghiaccio 2 ore prima dell'iniezione.
3. Una volta scongelata, diluire la bleomicina alla concentrazione di lavoro desiderata (0,02 U/50 μL o 0,005 U/50 μL) e mantenerla in ghiaccio.
   nota: La concentrazione....

Risultati

Tabella 1: Elenco delle dosi raccomandate di bleomicina per i ceppi di topo testati.

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Ceppo del topo	Linea cellulare	Numero di cellule iniettate	% attecchimento		p valore

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Supporto per intubazione per roditori	Braintree Scientifico	RIS-100	Supporto consigliato per l'iniezione intratracheale
Bleomicina	sigma	B5507-15UN	ATTENZIONE Pericolo per la salute GHS08
Catetere Exel 24G	pescatore	1484121	Rimuovere l'ago. Per iniezione intratracheale
Ketamina (Ketaset inl 100 mg/mL C3N 10 mL)	Maggiordomo Schein	Codice: 56344	Per anestetizzare i topi
Xilazina	Maggiordomo Schein	Codice: 33198	Per anestetizzare i topi
Siringa 1ml	BD / Pescatore	Codice 14-823-434	Per iniezioni intraperitoneali
Puralube Unguento oftalmico veterinario	BUTLER AZIENDA PER LA SALUTE DEGLI ANIMALI LLC	Codice: 8897	Per prevenire la secchezza oculare durante l'anestesia
ILLUMINATORE MI-150 150W MI-150	INDUSTRIE DOLAN-JENNER	MI-150 / EEG2823M	Per illuminare e visualizzare la trachea
Pinze Graefe, 2,75 (7 cm) di lunghezza	Roboz	RS-5111	Per iniezione intratracheale
Fiaschetta T/C 75cm collo quadrato inclinato, tappo blu	Fisher / Corning	353135
Soluzione salina tamponata con fosfato	Tecnologie per la vita	Codice 14190-144
0,25% tripsina-EDTA	Tecnologie per la vita	Codice 25200-056
Pipetta Pipet-Lite, Unv. SL-200XLS+	AEROPORTO INTERNAZIONALE METTLER-TOLEDO	17014411
Contacellule automatizzato Countess	Tecnologie per la vita	AMQAX1000
D-luciferina in polvere	Perkin Elmer Scienze della salute Inc	122799	Per l'imaging luminescente. Ricostituire la polvere con PBS per una concentrazione di lavoro di 15 mg/mL. Proteggi dalla luce
Bioluminiscenza xenogena dello spettro IVIS	Perkin Elmer Scienze della salute Inc	124262	Per l'imaging in bioluminescenza in vivo
Topi B6129SF1/J	Laboratori Jackson	101043
Celle NIH-H2030	ATCC	Codice CRL-5914
Celle PC9	Nguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51–62
Software per immagini viventi	Perkin Elmer Scienze della salute Inc	128113	Per l'analisi in vivo della bioluminescenza