Saggio di fototossicità in vitro: un metodo basato sulla PDT per valutare il potenziale fototossico di un fotosensibilizzatore nelle cellule di cancro del polmone

Abstract

Fonte: Chang, J. E., et al. Efficacia antitumorale della terapia fotodinamica con nanoparticelle mirate al cancro del polmone.J. Vis. Exp.(2016).

La terapia fotodinamica (PDT) è un metodo non invasivo e non chirurgico per il trattamento del cancro del polmone. I fotosensibilizzatori si accumulano selettivamente nel tessuto tumorale e portano alla morte delle cellule tumorali in presenza di ossigeno e della corretta lunghezza d'onda della luce. In questo video protocollo, viene utilizzato un metodo basato sulla PDT per valutare il potenziale fototossico di un potenziale fotosensibilizzatore nelle cellule di cancro del polmone.

Protocollo

1. Sintesi di acido ialuronico-ceramide (HACE)

1. Solubilizzare 12,21 mmol di oligomero di acido ialuronico (HA) e 9,77 mmol di idrossido di tetra-n-butilammonio (TBA) in 60 ml di acqua bidistillata (DDW). Mescolate per 30 min.
2. Per sintetizzare il linker DS-Y30, sciogliere 8,59 mmol di ceramide DS-Y30 e 9,45 mmol di trietilammina in 25 ml di tetraidrofurano (THF). Miscelare con 8,59 mmol di cloruro di 4-clorometilbenzoile in THF. Agitare per 6 ore a 60 °C.
3. Sciogliere gli 8,10 mmol sintetizzati di HA-TBA e 0,41 mmol di linker DS-Y30 in una miscela di THF e acetonitrile (4:1, v/v). Agitare per 5 ore a 40 °C.
4. Rimuovere le i....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
acido ialuronico oligo	Fornitore verificato - Bioland Co., Ltd.
DS-Y30 (ceramide 3B; principalmente noleoil-fitosfingosina)	Fornitore verificato - Doosan Biotech Co., Ltd.
acido adipico diidrazide	Sigma Aldrich	Codice A0638
N-(3-dimetilamminopropil)-N'- etilcarbodiimmide	Sigma Aldrich	Codice 39391
cloruro di 4-(clorometil)benzoile	Sigma Aldrich	270784
Paclitaxel	Corporazioni Taihua
filtro per siringa	Sartorius Stedim Biotech GmbH	Telefono 17762	15 mm, RC, PP, 0,45 μm
RPMI-1640	Gibco Life Technologies, Inc.	Codice: 11875
Penicillina-streptomicina	Gibco Life Technologies, Inc.	Codice: 15070
Siero fetale bovino	Gibco Life Technologies, Inc.	16140071
Celite (Agente filtrante)	Sigma Aldrich	Codice 6858	Vedere il passaggio 1.4