Saggio di marcatura degli impulsi con bromodeossiuridina: una tecnica per misurare la proliferazione cellulare

Abstract

Fonte: Welschinger R. et al. Monitoraggio temporale della progressione del ciclo cellulare utilizzando la citometria a flusso senza la necessità di sincronizzazione. J. Vis. Exp. (2015)

Il video descrive il test di marcatura graduale degli impulsi di cellule di mammifero con bromodeossiuridina (BrdU) per misurare la proliferazione cellulare. L'assorbimento di BrdU consente il tracciamento temporale delle cellule che si trovavano nella fase di sintesi in un momento specifico, senza richiedere la sincronizzazione delle cellule.

Protocollo

1. Soluzioni e reagenti

1. RPMI completo
   1. Aggiungere 56 ml di siero fetale di vitello (FCS) e 5,5 ml di 200 mM di L-glutammina a un flacone da 500 ml di terreno RPMI-1640.
2. Soluzione Stock BrdU
   1. Preparare 32,5 mM di BrdU (10 mg/ml) in soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco (DPBS).
3. BrdU RPMI completo
   1. Aggiungere 6,2 μl di soluzione madre di BrdU a 10 ml di Complete RPMI.
4. Soluzione DNase
   1. Preparare 1 mg di DNasi/ml in DPBS.
5. Tampone di colorazione
   1. Preparare FCS inattivato termicamente al 3% e sodio azi....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
NALM6	DSMZ	ACC-128
5-Bromo-2′-deossiuridina	sigma	B5002-1G
RPMI 1.640 senza L-Gln 500 ml	Lonza	12-167F
DPBS	Lonza	17-512F
Siero fetale bovino	FisherBiotec	FBS-7100113
Incubatore a CO2	raccoglitore	C 150
Tubi FACS BD Falcon 12 x 75 mm	BD Bioscienze	352008
Citometro a flusso BD LSR FORTESSA	BD Bioscienze	FORTESSA
centrifuga	Spintron	GT-175R