Selezione delle cellule di leucemia basata su colonna G-10: un metodo per purificare le cellule di leucemia linfoblastica acuta dalle cellule stromali del midollo osseo

Abstract

Fonte: Slone, W. L., et al. Modellazione della leucemia resistente alla chemioterapia in vitro. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video descrive la separazione delle cellule di leucemia linfoblastica acuta dalle cellule stromali del midollo osseo utilizzando colonne G-10 di destrano reticolato di tipo gel dieci. Questo metodo aiuta a recuperare la popolazione di cellule tumorali che sono migrate al di sotto delle cellule stromali aderenti del midollo osseo, generando una popolazione di cellule tumorali "a fase attenuata".

Protocollo

1. Caricamento delle cellule di co-coltura sulla colonna G10

NOTA: Assicurati che il rubinetto sia completamente chiuso prima di aggiungere supporti contenenti celle alla colonna G10. Inoltre, ogni sottopopolazione deve essere analizzata su una colonna G10 separata in modo da non introdurre distorsioni tra le popolazioni nell'analisi a valle.

1. Utilizzando una pipetta da 1.000 μl, aggiungere 1 ml di ciascuna sottopopolazione cellulare in terreno preriscaldato a una colonna G10 separata a goccia. Assicurarsi che il supporto contenente le celle rimanga sopra o all'interno del pellet G10. Lasciare in....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Perline sephadex G10	sigma	G10120	Indicato nel manoscritto come particelle di destrano reticolato di tipo 10 in gel
Siringa sterile da 10 ml	Bd	309604
Rubinetti a 1 via	Strumenti di precisione del mondo, Inc.	Codice: 14054-10
Osteoblasti umani	PromoCell	C-12720	Gli osteoblasti umani sono stati coltivati secondo le raccomandazioni del fornitore.
Cellule stromali di Morrow osseo umano	Nucleo di campioni biologici WVU		leucemia umana primaria de-identificata e le cellule stromali del midollo osseo (BMSC) sono state fornite dal Mary Babb Randolph Cancer Center (MBRCC) Biospecimen Processing Core e dalla West Virginia University Department of Pathology Tissue Bank. Le colture BMSC sono state stabilite come descritto in precedenza (*)
0,05% Tripsina	Mediatech, Inc.	25-053-CI
Reh	ATCC	Codice ATCC-CRL-8286	Le cellule REH sono state coltivate secondo le raccomandazioni del fornitore e i terreni raccomandati
Lana di vetro	pirex	3950
Provette da centrifuga coniche da 50 ml	Prodotti medici in tutto il mondo	41021039	Utilizzate come provette di raccolta
Provette da centrifuga coniche da 15 ml	Prodotti medici in tutto il mondo	41021037	Utilizzato per la raccolta di cellule
Siero fetale bovino	sigma	F6178
SD-1	DSMZ	ACC 366	Gli SD-1 sono stati coltivati secondo le raccomandazioni del fornitore e i terreni consigliati
Piastre per colture cellulari da 100 x 20 mm	Greiner Bio-One	Codice 664160

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