Centrifugazione con gradiente di densità: un metodo per isolare le cellule CLL dal sangue periferico

Abstract

Fonte: Hay, J. et al. Frazionamento subcellulare delle cellule primarie di leucemia linfocitica cronica per monitorare il traffico di proteine nucleari/citoplasmatiche. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la tecnica di isolamento delle cellule di leucemia linfatica cronica (LLC) dal sangue periferico. Con questo protocollo, isoleremo le cellule CLL da campioni di sangue di pazienti umani per la successiva generazione efficiente di frazioni nucleari e citoplasmatiche.

Protocol

1. Isolamento delle cellule di LLC dai campioni di sangue dei pazienti

1. I campioni di sangue periferico di pazienti con LLC precedentemente consenzienti vengono ricevuti dalla clinica in provette per la raccolta del sangue EDTA, accompagnati dalla conta dei globuli bianchi (WCC). Purificare i campioni di LLC nel sangue periferico secondo il WCC. Per WCC < 40 x 10⁶ cellule/mL, procedere al passaggio 1.1.1; per WCC ≥ 40 x 10⁶ cellule/mL, procedere al passaggio 1.1.2.
   1. Versare il contenuto di tutte le provette di sangue EDTA in una provetta da centrifuga conica da 50 mL e aggiungere 50 μL di cocktail di arricchimento di cellule....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Provetta da 15 mL	Griener Bio one	188271
Provette per microcentrifuga da 1,5 mL	Griener Bio one	616201
Dmso	sigma	D2650
Edta	sigma	Eds
Siero fetale bovino	Thermofisher	10500064
Histopaque1077 mezzi di gradiente di densità	sigma	H8889
Soluzione blu di Trypan	Thermofisher	15250061
Compresse PBS	Fisher Scientifico	BR0014G
RosetteSep Cocktail di arricchimento delle cellule B umane	Tecnologie delle cellule staminali	Codice: 15064
Sigma 3-16P	SciQuip		centrifuga