Preparazione di frazioni subcellulari da cellule leucemiche: un metodo per generare frazioni cellulari e nucleari da cellule leucemiche

Abstract

Fonte: Hay, J., et al. Frazionamento subcellulare delle cellule di leucemia linfocitica cronica primaria per monitorare il traffico di proteine nucleari/citoplasmatiche. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la preparazione di frazioni subcellulari da cellule leucemiche, che è un metodo per generare frazioni cellulari e nucleari da cellule leucemiche. Le frazioni nucleari e citoplasmatiche possono essere utilizzate per ulteriori analisi a valle.

Protocollo

1. Preparazione di frazioni subcellulari da cellule di LLC

NOTA: Quando pianifichi l'impostazione sperimentale, includi un pozzetto di cellule non stimolate/non trattate da cui può essere generato l'intero estratto cellulare.

1. Eseguire la stimolazione e/o il trattamento farmacologico desiderati della linea cellulare di LLC MEC1 o delle cellule primarie di LLC isolate utilizzando 10 – 20 x 10⁶ cellule/condizione. Le cellule verranno quindi utilizzate per il frazionamento subcellulare o per generare l'estratto di cellule intere come spiegato di seguito:
2. Preparazione di soluzioni/provett....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Provette per microcentrifuga da 1,5 mL	Griener Bio one	616201
Edta	sigma	Eds
Labnet VX100	Fisher Scientifico		vortice
Kit di estratto di Nucelar	Motivo attivo	40010
Compresse PBS	Fisher Scientifico	BR0014G
Sigma 3-16P	SciQuip		centrifuga
Sigma 1-15PK	SciQuip		centrifuga