Articolo metodologico

Saggio CFU a base di metilcellulosa: un metodo per determinare l'effetto dei composti antitumorali sulla formazione di colonie nelle cellule leucemiche

30 aprile 2023

In questo articolo

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Kesarwani, M., et al. Metodi per valutare il ruolo di c-Fos e Dusp1 nella dipendenza da oncogeni. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive il protocollo per l'unità di formazione di colonie a base di metilcellulosa o saggio UFC, che aiuta a identificare e contare il numero di colonie formate da cellule leucemiche in risposta al trattamento con composti antitumorali.

Protocollo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Saggi delle unità formanti colonie

  1. Scongelare la metilcellulosa con citochine per topi a temperatura ambiente per 1-2 ore. Aliquotare 3 mL di metilcellulosa in una provetta FACS utilizzando una siringa da 5 mL senza ago. Ordina le celle YFP-positive su un selezionatore di cellule.
  2. Far girare le celle verso il basso e sospendere il pellet in un mezzo completo IMDM. Contare le cellule da placcare e diluirle per ottenere 5.000 cellule YFP-positive in 100 μL di terreno completo IMDM.
  3. Aggiungere 100 μl di sospensione cellulare contenente 5.000 cellule YFP-positive e gli inibitori appropriati a 3 mL di metilcellulosa. Agitare al massimo pe....

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Dichiarazioni

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
IMDMCellgro (corning)15-016-CVR
MethoCult GF M3434 (metilcellulosa per topi CFU)cellula staminaleTelefono 3434
4-idrossitamoxifenesigmaH6278
SCF murino ricombinanteProspettivaCYT-275
Legante murino ricombinante Flt3ProspettivaCYT-340
IL-6 murina ricombinanteProspettivaCYT-350
IL-7 murina ricombinantePeprotech217-17
DfcLaboratori LKT Inc.D3420
BCIChemzon ScientificNuova Zelanda-06-195
ImatinibLC LaboratorI-5508
1x PBSCellgro (corning)21-040-CV
1/2 cc Siringa da insulina Lo-Dose u-100 28 G1/2Becton Dickinson329461
Cloruro di iodonitrotetrazoliosigmaI10406
strumenti
Incubatore a CO2 NAPCO serie 8000 WJTermo scientifico
Rotore a benna oscillante cetrifugo 5810REppendorf
C-1000 TermociclatoreBio-RAD
ChemiDoc Imaging System (sistema di imaging per gel e western blot)Bio-RAD17001401
topi
ROSACreERT2Laboratorio Jackson
ROSACreERT2/c-Fos fl/fl Dusp1-/Fatto in casa
ROSACreERT2/c-Fosfl/flFatto in casa

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Tag

Saggio CFU con metilcellulosaunit formanti coloniacomposti antitumoralicellule progenitricimatrice di metilcellulosacolorazione con iodonio nitrotetrazoliostimolazione con citochineconteggio delle colonieincubazione di colture cellulari

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