Isolamento delle cellule T-ALL marcate in fluorescenza: un metodo per isolare le cellule T-ALL da zebrafish adulti

Abstract

Fonte: Pruitt, M. M., et al. Isolamento della popolazione laterale nella leucemia linfoblastica acuta a cellule T indotta da Myc nel pesce zebra. J. Vis. Exp. (2017).

Questo protocollo descrive la tecnica di isolamento delle cellule tumorali della leucemia linfoblastica acuta (T-ALL) marcate con fluorescenza da un pesce zebra adulto e di quantificazione utilizzando il colorante blu di tripano.

Protocollo

1. Raccolta di cellule T-ALL marcate in fluorescenza dal pesce tumorale primario

1. Preparare almeno 20 ml di siero fetale bovino inattivato termicamente al 10% in soluzione salina tamponata con fosfato 0,9x (FBS/PBS).
2. Aggiungere 1 mL di FBS/PBS a una fiala di sale sodico di eparina (300 unità).
3. Seleziona i pesci portatori di tumori in più del 50% del corpo o quei pesci che hanno difficoltà a mangiare o nuotare. Sacrificare i pesci sovradosandoli con tricaina o con immersione in acqua ghiacciata. Confermare la morte per mancanza di movimento branchiale e battito cardiaco.
4. Usa una lama di rasoio per rimuovere la t....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Pesce zebra singeneico (CG2)			Vedi Mizgireuv et al., 2006
rag2: plasmide c-myc			Laboratorio Langenau
rag2: plasmide GFP costruito nel laboratorio de Jong			promotore rag2 del Laboratorio Langenau
plasmide pCS2-trasposasi			Laboratorio Chien
Microscopio SteREO Discovery V8	Microscopia Carl Zeiss	Numero 495015-0008-000
Tricaina metanosulfonato (MS-222)	Chimica occidentale, Inc	Fisher Scientific - NC0342409	100 g
Siero fetale bovino (FBS)	Laboratori HyClone, Inc.	Fisher Scientific - SH3007103	500 ml
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)	Gibco di Life Technologies	Codice 1001-023	pH 7,4 (1x) - 500 mL
Sale sodico di eparina	Sigma-Aldrich	Codice: 2106	15 - Fiale da 300 unità
Filtro a rete da 40 μm	Marchio Falcon Corning	Codice 352340	Cassa da 50
Tripan blu	Sigma Scienze della Vita	T8154	20 mL - Soluzione (0,4%)