Saggio di formazione di sfere: un metodo in vitro per identificare le cellule staminali del cancro del pancreas e le terapie di screening

In questo articolo

Abstract

Fonte: Lonardo, E. et al. Studiare le caratteristiche delle cellule staminali del cancro al pancreas per sviluppare nuove strategie di trattamento. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video dimostra il protocollo per lo sviluppo di sferoidi di cellule staminali per il cancro del pancreas in vitro. Il test può servire come strumento di screening per identificare i composti che potenzialmente colpiscono le cellule staminali tumorali.

Protocollo

1.Saggio e analisi della formazione della sfera

Saggio di formazione delle sfere e trattamento con metformina
1. Prendere il numero richiesto di cellule e aggiungere il volume appropriato di terreno CSCs per preparare una concentrazione cellulare di 2.000 cellule/ml. Non tenere la sospensione cellulare in ghiaccio per non più di 1 ora e mescolare bene prima della placcatura.
2. Aggiungere 500 μl di PBS 1X alla prima e all'ultima fila di una piastra a 24 pozzetti per l'umidificazione per ridurre al minimo l'evaporazione del mezzo. Seminare le cellule in piastre di cellule a bassissimo attac....

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Risultati

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Figura 1. Il trattamento con metformina inibisce il consumo di ossigeno e induce la produzione di ROS. (A) L'aggiunta di metformina inibisce il consumo di ossigeno (OCR) delle cellule derivate da sfere. Due diverse sfere secondarie di PDAC sono state trattate con metformina e le variazioni dell'OCR sono state misurate mediante analisi del flusso extracellulare. L'in.......