Monitoraggio del microambiente tumorale basato su PTM: un metodo per monitorare i cambiamenti nella rigidità della ECM utilizzando gli sferoidi tumorali

Abstract

Fonte: Jones, D. P., et al. Misurazione longitudinale della rigidità della matrice extracellulare in modelli tumorali 3D utilizzando la microreologia a tracciamento delle particelle. J. Vis. Exp. (2014).

Questo protocollo descrive una tecnica per monitorare i cambiamenti di rigidità della matrice extracellulare utilizzando la microreologia a tracciamento delle particelle (PTM). Questo viene fatto coltivando sferoidi tumorali pancreatici 3D in ECM con sonde fluorescenti incorporate per il tracciamento e l'analisi delle particelle video.

Protocollo

1. Preparazione di sferoidi tumorali 3D incorporati nell'ECM

1. Preparare una stazione di lavoro con i materiali necessari all'interno di una cappa a flusso laminare.
2. Preparare una miscela diluita di sonde traccianti fluorescenti da 1 μm di diametro modificate con carbossilato aggiungendo 2 parti di sonde stock (2% di solidi) a 25 parti di acqua sterile.
3. Estrarre un flacone di 3,1 mg/ml di collagene bovino dal frigorifero e metterlo sul ghiaccio.
4. Aliquotare 125 μl di collagene in un flaconcino vuoto da 2 ml.
5. Aggiungere 50 μl di soluzione diluita della sonda tracciante alla fiala contenente il collagene ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Collagene bovino di tipo 1	BD Biosciences, San Jose, CA	354231
PANC-1	Coltura cellulare di tipo americano, Manassas, VA	CRL1469	o altro tipo di cella appropriato
Microsfere fluorescenti	Tecnologie per la vita, Carlsbad, CA	906906
agarosio	Fisher Bioreagenti, Waltham, MA	C12H18O9
NaOH	Fisher Bioreagenti, Waltham, MA	NC0480985
Piastre ai fosfori a 96 pozzetti	Corning Inc., Corning, NY	Codice: 3904
DMEM	Hyclone, Waltham, MA	SH30243.01	o terreni di coltura cellulare appropriati
Microscopio Zeiss AxioObsever	Zeiss, Oberkochen, Germania		Include fotocamera ad alta velocità e software di imaging