Coltura rapida di melanociti murini primari e fibroblasti: isolamento di melanociti e fibroblasti da un campione di pelle intera murina

Abstract

Fonte: Murphy, B. M. et al. Generazione rapida di colture primarie di melanociti murini e fibroblasti. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video descrive il metodo rapido per isolare e coltivare contemporaneamente i melanociti e i fibroblasti dalla pelle del cucciolo di topo postnatale. Queste cellule possono essere mantenute e manipolate in vitro per studiare la biologia delle cellule della pelle, la guarigione delle ferite e il melanoma.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Isolamento di melanociti e fibroblasti

1. Eutanasia di cuccioli maschi e/o femmine di C57Bl/6J di età compresa tra 0 e 4 giorni mediante decapitazione e rimozione delle estremità dai topi soppressi utilizzando le forbici chirurgiche.
2. In una cappa a flusso laminare, arrotolare brevemente il tronco di ciascun topo in una capsula di Petri sterile contenente il 70% di etanolo. Togliete il tronco dall'etanolo e mettetelo in una capsu....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Etanolo, 200 proof	Fisher Scientifico	22032601
Soluzione antibiotica antimicotica (100x)	Sigma-Aldrich	Codice: A5955
Trinciafazzoletti McIlwain	Ted Pella	Codice: 10180
Lama per tritatessuti	Ted Pella	121-6
Disco di plastica per tritatessuti	Ted Pella	Codice 10180-01
Collagenasi Tipo I	Worthington Biochemicals	LS004156
Tripsina suina	Sigma-Aldrich	85450C
tripsina	VWR	VWRL0154-0100
G418 Disolfuro	P212121	LGB-418-1
Aquila di Dulbecco modificata media	Gibco	Codice 12800-082
Supporti RPMI 1640	Sigma-Aldrich	Codice: R8758
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco	Sigma-Aldrich	D8537
piatto per coltura cellulare a 6 pozzetti	Sigma-Aldrich	SIAL0516
Provette da 5 mL in polistirene a fondo tondo	Fisher Scientifico	352008
Piatto per coltura cellulare da 10 cm	Corning	430167
Albumina sierica bovina	Fisher Scientifico	BP9706-100
Siero fetale bovino	Sigma-Aldrich	Codice: 12306C
Corning Soluzione di penicillina/streptomicina	Fisher Scientifico	30-002-CL
Miscela di nutrienti F-12 Ham's Media	Sigma-Aldrich	N6760
Collagene dalla coda di topo	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale C7661
Filtro per siringa sterile in PES da 0,2 μm	VWR	Codice 28145-501
Filtro cellulare da 40 μm	Fisher Scientifico	22363547
Filtro cellulare da 70 μm	Fisher Scientifico	22363548
Tossina del colera	Sigma-Aldrich	Codice: C8052
Siero di cavallo	Fisher Scientifico	26050088
HyClone L-Glutammina	Fisher Scientifico	SH3003402