Visualizzazione dell'espressione proteica basata su CUBIC: una procedura per visualizzare l'espressione proteica nelle biopsie cutanee di topo a tutto spessore

Abstract

Fonte: Liang, H. et al. Il protocollo CUBIC visualizza l'espressione proteica alla risoluzione di una singola cellula nelle preparazioni cutanee a montatura intera. J. Vis. Exp (2016)

Questo video descrive la tecnica di visualizzazione basata su CUBIC, una tecnica di imaging dipendente dalla pulizia dei tessuti per la valutazione visiva dell'espressione proteica in biopsie cutanee a montaggio intero con risoluzione di una singola cellula in 3D. Questo protocollo tecnicamente semplice consente la visualizzazione delle proteine cutanee senza preparare sezioni cutanee.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Preparazione del tessuto cutaneo trasparente del topo

NOTA: Tutti i topi utilizzati in questo studio avevano un background genetico C57BL/6

1. Raccolta di tessuto cutaneo di topo.
   1. Sopprimere umanamente i topi mediante lussazione cervicale.
   2. Rimuovere con cautela i peli dall'area cutanea interessata con un rifinitore, facendo attenzione a non ferire la pelle.
   3. Lav....

Results

Figura 1: Preparazione della camera di imaging. R: I materiali di consumo necessari per la preparazione della camera di imaging sono puntina blu, plastilina o simili e 2 vetrini coprioggetti (24 x 50 mm). B: Preparare due strisce sottili di puntina blu (diametro circa 2 mm x 2 cm) e due vetrini coprioggetti. C: Posizionare le strisce di puntine blu su un vetrino copr.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paraformaldeide	Sigma-Aldrich	P6418
Etanolo 96% (non denaturato)	Fornitura chimica	UN1170
4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI)	Roche	10236276001
N,N,N',N'-tetrakis (2-idrossipropil) etilendiammina	Merck Millipore	Codice 821940
Polietilenglicole mono-p-isoottilfenil etere	Merck Millipore	648462
Triton X-100	Merck Millipore	648462
saccarosio	Sigma-Aldrich	S0389
Temperatura di taglio ottimale (OTTOBRE) Composto	Tessuto-Tek	4583
anticorpo anti-cheratina14	Covance	PRB-155P
anticorpo anti-Ki67	Abcam	ab16667
Asino anti-coniglio Alexa 594	Tecnologie per la vita	Codice: A21207
Dimetilsolfossido	Sigma-Aldrich	D2650
urea	Merck Millipore	Codice 66612
2,2′,2′'-nitrilotriteanolo	Merck Millipore	137002
Microscopio confocale	Strumenti Nikon Inc	Nikon A1 - Microscopio confocale
cruZer6 Rifinitore frontale	Braun	Braun cruZer6 Face
Aziduro di sodio	Sigma-Aldrich	438456