Transgenesi vettoriale miniCoopR: una tecnica per lo screening dei geni che inducono il melanoma nel modello tumorale di zebrafish

Abstract

Fonte: Iyengar, S. et al. Screening per modificatori di melanoma utilizzando un modello di tumore autoctono di pesce zebra. J. Vis. Exp. (2012)

Questo video descrive un metodo per lo screening dei geni modificanti il melanoma utilizzando un modello di tumore transgenico di zebrafish. Quando viene iniettato con un vettore miniCoopR che induce il melanoma, il pesce zebra sviluppa melanomi e può quindi essere utilizzato per studiare i fattori genetici che influenzano lo sviluppo del tumore nel pesce zebra.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Screening per i modificatori di insorgenza del melanoma

1. Creare cloni di ingresso centrale Gateway mediante PCR, amplificando l'intero frame di lettura aperto dei geni di interesse (GOI) e ricombinandosi in pDONR 221 utilizzando BP clonasi II (Invitrogen). Utilizzare la tecnologia Multisite Gateway (Invitrogen) per ricombinare p5E_mitfa, pME_GOI, Tol2kit #302 p3E_SV40polyA e miniCoopR per posizionare i geni di interesse sotto i....

Risultati

Figura 1. Screening per i modificatori di insorgenza del melanoma utilizzando il test miniCoopR. A) Schema del saggio miniCoopR. Embrione con melanociti salvati (punta di freccia) contenente il vettore miniCoopR e il gene di interesse. Barra della scala = 250 μM. Adulto con recupero di melanociti superiore a^{4 mm 2} (punta di freccia). Barra della scala = 500 μM B) <.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Reagenti di ricombinazione gateway	Invitrogen
miniCoopR
Anticorpo Mitfa
Anticorpo IgG anti-coniglio di capra FITC	Invitrogen
Vectashield	Laboratori vettoriali	H-1000
casper Zebrafish
701N Siringa da 10 μl	Hamilton/Fisher	14-824
Filtro da 40 μM	BD Falco/Pescatore	Codice 352340
FBS	Invitrogen	26140079