Articolo metodologico

Saggio di invasione delle cellule tumorali: un metodo 3D in vitro basato su matrice nativa per valutare le interazioni tra cellule epiteliali-mesenchimali

30 aprile 2023

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Ng, Y. Z. et al. Ingegneria tissutale del microambiente stromale tumorale con applicazione all'invasione delle cellule tumorali. J. Vis. Exp. (2014)

Questo video descrive la tecnica di utilizzo di una matrice nativa per studiare l'invasione delle cellule tumorali. La tecnica utilizzata in questo test fornisce la capacità di valutare le interazioni tra cellule epiteliali-mesenchimali in un ambiente 3D senza la necessità di una matrice sintetica o estranea.

Protocollo

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1. Preparazione di terreni e reagenti

  1. Preparazione di 200x di acido L-ascorbico 2-fosfato
    1. Sciogliere 29 mg di acido L-ascorbico 2-fosfato per 5 mL di soluzione di Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) e filtrare attraverso un filtro a membrana da 0,22 μm. Conservare in aliquote sterili da 0,25 mL a -20 °C.
    2. Aggiungere 0,25 mL di aliquote di 200x acido L-ascorbico 2-fosfato a ogni 50 mL di terreno per fibroblasti (DMEM con 1% di L-glutammina e 10% di siero fetale bovino) il giorno richiesto, per una concentrazione finale di 0,1 mM di acido L-ascorbico 2-fosfato.
  2. Preparazione dei terreni di c....

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Risultati

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Figura 1. Flusso di lavoro della generazione della matrice nativa derivata da fibroblasti e del saggio di invasione tumorale.

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Acido L-ascorbico 2-fosfato sigmaCodice: A8960
DMEM con L-glutammina, 4.500 mg/L di D-glucosio, 110 mg/L di piruvato di sodio Tecnologie per la vitaCodice 11995-073
100x Penicillina-Streptomicina Tecnologie per la vitaCodice: 15070
vaselina VWRPROL28908.290
Cilindri clonali sigmaZ370789
Disco filtrante a rete in nylon idrofilo 100 μm 25 μm diametro 100/pz MilliporeNY1H02500
Supporto in rete metallica piegata in acciaio inox Fatto in casaLe dimensioni sono state realizzate in modo che la rete si inserisse in piastre a 6 pozzetti

Ristampe e permessi

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Tag

Saggio in vitro 3DMetodo a matrice nativaInterazioni epitelio mesenchimaliSospensione cellulare di fibroblastiDeposizione di matrice extracellulareInterfaccia aria liquidoCarcinoma cutaneo a cellule squamoseTerreni di crescita per cheratinocitiSaggio del cilindro clonale

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