Imaging cronica di mouse corteccia visiva Utilizzando un Assottigliato-teschio di preparazione

Summary

In questo materiale video e supplementare, mostriamo un protocollo per la cronica In vivo del cervello intatto con un assottigliato-teschio di preparazione.

Abstract

Imaging in vivo con due fotoni microscopia a scansione laser (2PLSM) permette lo studio delle cellule viventi e dei processi neuronali nel cervello intatto. La tecnica qui presentata permette l'imaging della stessa area del cervello, in momenti diversi (cronica imaging) con risoluzione microscopica che permette il tracciamento delle spine dendritiche, che sono le strutture di piccole dimensioni che rappresentano la maggioranza dei siti post-sinaptici eccitatori nel SNC. La capacità di risolvere in modo chiaro multa strutture corticali sui punti più volte ha molti vantaggi, in particolare nello studio della plasticità del cervello in cui i cambiamenti morfologici a sinapsi e rimodellamento del circuito può contribuire a spiegare i meccanismi sottostanti. In questo materiale video e complementari, mostriamo un protocollo per la cronica imaging in vivo del cervello intatto con un assottigliato-teschio di preparazione. Il diradamento-cranio preparazione è un approccio mini-invasivo che evita potenziali danni per la durata e / o corteccia, riducendo così l'insorgenza di una risposta infiammatoria. Quando questo protocollo è eseguita correttamente, è possibile monitorare in modo chiaro i cambiamenti nelle caratteristiche spine dendritiche nel cervello intatto per un periodo prolungato di tempo.

Protocol

1. Per visualizzare i neuroni nel cervello intatto utilizzando la microscopia a due fotoni, una preparazione in cui i neuroni sono etichettati con marcatori fluorescenti viene utilizzato. Negli esperimenti qui presentati usiamo la GFP-M linea di topi transgenici che le etichette strato di 5 cellule piramidali ^1. Layer 5 cellule piramidali progetto processi dendritiche in strati superficiali, permettendo la visualizzazione dei dendriti e spine dendritiche fino ad una profondità di 300 micron al di sotto del livello della pia. Un approccio alternativo è quello di cellule etichetta utilizzando marcatori virali (vedi Lowery et al. Sottoposti a Giove).
2. Steriliz....

Discussion

Immagini cronico usando la microscopia a due fotoni sta diventando una tecnica sempre più popolare per studiare i cambiamenti morfologici sono innescate durante ^2-5 plasticità. Qui dimostrare un assottigliato-teschio preparazione da seguire identificato spine dendritiche nel cervello di topo intatto nei giorni di imaging diverse. In questo protocollo, il cranio è lasciato intatto, causando danni minimi alla corteccia e conseguente livelli molto bassi di neuroinfiammazione che possono alterare la funzione del .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fentanyl Citrate		In House		Cocktail di Fentanyl: cocktail anestetico; IP Dose: 0,0125 ml/g Cocktail finale conc.: 0,05 mg/kg
Medetomindina cloridrato		In House		Fentanyl Cocktail: cocktail anestetico; IP Dose: 0,0125 ml/g Cocktail finale: 0,05 mg/kg
Midazolam HCL		In House		Fentanyl Cocktail: cocktail anestetico; IP Dose: 0,0125 ml/g Cocktail finale conc.: 0,05 mg/kg
2,2,2-tribrom– thanol				Avertin Cocktail: Anestetico; IP Dose: 0,0075 cc/ g Cocktail finale conc.: 1%
2-metil-2-butanolo (Concentrazione finale: 0,775%)				Avertin Cocktail: Anestetico; IP Dose: 0,0075 cc/ g Final cocktail conc.: .775%
TC-1000 Temp. Sistema di controllo per topi		CWE, Inc.	TC-1000
Toberadex		Unguento per gli occhi	in casa
10% Cloruro		Ricca Chemical Company	3120-32	Preparazione del cranio sottile
Lama		Sable Industries	S-6400	Preparazione del cranio sottile
Cianoacrilato 404,401		Loctite	P/N 46551	Preparazione del cranio sottile
Cianoacrilato 401		Loctite	P/N 40140	Preparazione del cranio sottile
Zip Kicker Colla Acceleratore		Tecnologia Pacer	PT-29	Preparazione del cranio sottile
Micro Drill Sbavature in acciaio Diametro		Strumenti per le scienze	19008-07	Preparazione del cranio
sottile Scatola di controllo Microtorque e manipolo	Tech2000	Prodotti Ram, Inc.	TECH2000ON/OFF	Preparazione del cranio sottile
#6-0 (0,7 metrico) sutura		Ethicon Inc.	K8894H	Taper C-1
, 10 cm, larghezza punta 0,5 mm, curve	Strumenti chirurgici	Strumenti per scienze fini	11152-10
Forbici Bonn extra fini, 8,5 cm, punta dritta, tagliente Strumenti chirurgici da 13 mm	Strumenti per	scienze fini	14084-08
Pinze modello standard, dritte, punta 2,5 mm x 1,35 mm, 12 cm	Strumenti chirurgici	Strumenti per scienze fini	11000-12