Targeting di strutture cerebrali profonde con microiniezioni di consegna dei farmaci, vettori virali, o trapianti di cellule

Sommario

In questo articolo, mostriamo un metodo per fare gli aghi capillare di vetro con un 50-micron lumen. Questa tecnica riduce in modo significativo il danno al cervello, riduce al minimo la diffusione passiva di farmaci e permette una mira precisa nel cervello dei roditori.

Abstract

Microiniezioni nel parenchima cerebrale sono importanti procedure per la fornitura di farmaci, vettori virali o trapianti di cellule. La lesione del cervello che produce l'iniezione di un ago durante la sua traiettoria è una delle principali preoccupazioni soprattutto nel cervello di topo non solo per il cervello è piccolo, ma a volte anche iniezioni multiple sono necessari. Mostriamo qui un metodo per produrre aghi capillare di vetro con un 50-micron lume che riduce significativamente i danni cerebrali e permette una mira precisa nel cervello dei roditori. Questo metodo permette una consegna di piccoli volumi (da 20 a 100 Nl), riduce i rischi di sanguinamento, e riduce al minimo la diffusione passiva dei farmaci nel parenchima cerebrale. Usando diverse dimensioni di tubi di vetro capillari, o cambiando il lume ago, diversi tipi di sostanze e cellule possono essere iniettato. Microiniezioni con un tubo capillare di vetro rappresentano un significativo miglioramento nelle tecniche di iniezione e cerebrale profonda targeting con danni collaterali minimi in piccoli roditori.

Protocollo

1. Fai aghi di vetro prima dell'intervento del mouse:
   1. Mettere il tubo capillare di vetro in un estrattore micropipetta.
   2. Di calore al centro del tubo di vetro per ammorbidire il tubo di vetro nella zona localizzata.
   3. Allungare il tubo di vetro lungo il suo asse longitudinale da una distanza iniziale sufficiente per causare una riduzione del diametro del tubo di vetro nella zona localizzata.
   4. Tenere il tubo di vetro che si estende fino a quando non si rompe. In questo modo, due aghi identici canna singola si ottengono.
2. Mettere l'ago di vetro in un microforge. Un angolo di 30 ° è sufficiente per smussare la punta.

Discussione

Il metodo mostrato in questo video è molto utile per fornire la maggior parte dei farmaci o vettori virali in luoghi molto preciso nel cervello. Alcuni dei principali vantaggi di questa tecnica sono l'affidabilità del punto di misura, l'accuratezza delle iniezioni e le piccole dimensioni della lesione cerebrale e danni tratto ^{1, 2, 5, 6.} Una volta che la tecnica è standardizzata la gamma di mistargeting deve 50 micron o meno ^{1, 2.} Trapianti di cellule può essere effettuata anche utilizzando.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Tubo di vetro capillare	Wiretrol I	5-000-1001
Tiratore di micropipette	Kopf Instruments	Modello 730
Microforgiatore	World Precision Instruments, Inc.	Modello 48000
Olio minerale	MSDS	M7700
Grasso per vuoto alto	Dow Corning	05054-AB
Anestesia: Avertin al 2,5%			2,2,2-tribromo–etanolo + alcol tert-amilico, 1:1 p/v
Piastra riscaldante	Mastex	Modello 900
Dispositivo stereotassico	Kopf Instruments	Modello Kopf-900
Lama di bisturi chirurgico n. 15	Medi-Cut
Microtrapano	Ideal Micro Drill	67-1000
Pinzette fini	Fine Science Tools
Micropipetta da 1-μL	Rainin
Parafilm M.
Microscopio chirurgico	Carl Zeiss, Inc.	Vasiorkop con sistema Contraves
Microiniettore	Narishige International	Modello MO-10