Il organotipica ippocampale Cultura Modello Slice per l'esame di danno neuronale

Sommario

Il organoptypic dell'ippocampo modello cultura fetta è un In vitro utilizzato per esaminare danno neuronale in una varietà di paradigmi. In questo articolo, si descrivono i metodi per la generazione di culture fetta e quantificare danno neuronale.

Abstract

Organotipica cultura fetta ippocampo è un metodo in vitro per esaminare i meccanismi di danno neuronale, in cui l'architettura di base e la composizione dell 'ippocampo è relativamente preservata ^1. Il sistema di coltura organotipica consente l'esame degli effetti neuronali, astrociti e microglia, ma come preparazione ex vivo, non affronta gli effetti del flusso sanguigno, o reclutamento di cellule infiammatorie periferiche. A tal fine, questo metodo cultura viene spesso utilizzato per esaminare lesioni eccitotossico e ipossia ai neuroni piramidali dell'ippocampo, ma è stato utilizzato anche per esaminare la risposta infiammatoria. Qui si descrivono i metodi per la generazione di culture fetta dell'ippocampo dal cervello di roditori dopo la nascita, l'amministrazione stimoli tossici per indurre danno neuronale, e il saggio e la morte dei neuroni dell'ippocampo quantificare.

Protocollo

1. Preparazione

Prima di iniziare, montare gli strumenti chirurgici necessari, dissezione e terreni di coltura, e 7 giorni vecchio topo o cuccioli di topo. Il protocollo è lo stesso per il mouse e preparati ratto.

(I) Materiali e attrezzature

• Forbici operativo (dritto lunghezza 6 ", cat # RS6818, Roboz, Gaithersburg, MD)
• Micro dissezione forbici, (lunghezza 4 '", cat # RS5910. Roboz, Gaithersburg, MD)
• Acciaio al carbonio Dumont Pinzetta (cat # RS-5045.Roboz, Gaithersburg, MD)
• Modificato vetro "trasferimento" pipette (in fondo alla pipetta Pasteur rimosso e levigato bordo) ....

Discussione

Ci sono due punti importanti da seguire per garantire risultati riproducibili e coerenti quando si replica esperimenti. In primo luogo, è importante lasciare che l'età dell'ippocampo fette per 12-14 giorni prima della sperimentazione. Con isolamento fetta, vi è una significativa risposta della microglia, e microglia rimangono attivi per un certo tempo, con un ritorno ad uno stato di riposo ramificata che si verificano di giorno 10 in vitro ^3,6. In secondo luogo, intensità media PI fluorescenz.......