Agar-Block Microcosmi per decomposizione controllata tessuti vegetali da Funghi aerobica

Sommario

Questo video dimostra un approccio controllato ambiente per studiare la degradazione dei tessuti vegetali lignocellulosici da funghi aerobico. La capacità di controllare le fonti di nutrienti e l'umidità è un vantaggio chiave di agar-block microcosmi, ma l'approccio produce spesso alterne fortune. Ci rivolgiamo insidie ​​critici cedere riproducibile, a bassa variabilità dei risultati.

Abstract

I due metodi principali per lo studio biodegradazione fungine dei tessuti vegetali lignocellulosiche sono stati sviluppati per i test del legno (suolo-block; agar-block). E 'ben accettato che il suolo-block microcosmi rendimenti più elevati tassi di decadimento, meno problemi di umidità, bassa variabilità tra gli studi, e soglie più elevate di tossicità conservante. Suolo-block test è quindi la tecnica più utilizzata ed è stato standardizzato dalla American Society for Testing and Materials (ASTM) (metodo D 1413-07). Il terreno blocco design è inconvenienti, però, utilizzando fonti suolo localmente variabile e nel limitare il controllo delle sostanze nutritive esterna (esogena) ai tessuti in decomposizione. Questi svantaggi sono emersi come un problema per l'applicazione di questo metodo per gli altri, ha come obiettivo la ricerca sempre più popolare. Questi obiettivi includono moderni legnocellulosa degradante per la ricerca per la bioenergia, il collaudo biorisanamento di co-metabolizzata sostanze tossiche, valutando i meccanismi ossidativi e il monitoraggio elementi traslocato lungo le reti ifale. Suolo blocchi non prestano abbastanza controllo in queste applicazioni. Un raffinato agar-block approccio è necessario.

Qui usiamo il marciume bruno legno degradanti fungo lacrymans Serpula a degradare legno in agar-blocco microcosmi, con profondo Petri con basso contenuto di calcio agar. Testiamo il ruolo di esogeni gesso su decadimento in una serie temporale, per dimostrare l'utilità e la variabilità attesa. Isolati da una singola scheda rip (taglio longitudinale) sono condizionati, pesato, in autoclave, e introdotto in modo asettico in cima a una rete di plastica. Vaccinazioni fungine sono in ogni faccia del blocco, con esogena gesso aggiunti alle interfacce. Raccolti sono asettiche fino al raccolto finale distruttivo. Questi microcosmi sono progettati per evitare il contatto blocco con agar o pareti piastra di Petri. Condensa è ridotto al minimo durante piatto versa e durante l'incubazione. Infine, l'inoculo / gesso / legno spazio è ridotto al minimo, ma senza permettere contatto. Questi aspetti meno tecnici di agar-block design sono anche le cause più comuni di fallimento e la principale fonte di variabilità tra gli studi. Pubblicazione del video è quindi utile in questo caso, e dimostriamo a bassa variabilità, risultati di alta qualità.

Protocollo

Questo protocollo si applica a substrati legnosi e non legnosi, come indicato, oltre al materiale forno o aria secca. Leggere il primo protocollo, tuttavia, prima di set-up. Ci sono diversi punti sollevati che potrebbero valere per il vostro studio, e questi punti (sottolineato) richiedono una pianificazione. Si noti inoltre che ci sono due pubblicati agar-block metodi che sono a volte utilizzati, uno dei British Standard 838 e un altro a seguito di un gruppo di ricerca internazionale per la protezione del legno (IRG-WP) documento presentato da Bravery (1978). Il nostro metodo assomiglia a 838, con modifiche soprattutto nella progettazione microcosmo e il controllo d....

Discussione

Utilizzando il nostro agar-block set-up (Figura 1) lacrymans Serpula cresciuto a diretto contatto con le superfici in gesso e in blocchi di legno (Figura 2), portando a oltre il 60% di perdita di peso nel marrone-decomporsi controllo blocchi di pino (Figura 3 ). Questo soddisfa facilmente l'obiettivo standard ASTM di decadimento> 50% e il coefficiente medio di variazione (C _V) nel decadimento in era 0,055 alla settimana 16. Questi dati vengono pubblicati in Schilling ^7. Ancora una v.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastre di Petri	Nalge Nunc international	4014	25 x 150 mm
Agar, Tipo A	Sigma-Aldrich	A4550
Nitrato di ammonio, NH4NO3	Millinckrodt	3436-12
Fosfato di potassio, KH2PO4	JT Baker	3246-01
Solfato di magnesio 7-idrato, MgSO4• 7H2O	Sigma-Aldrich	230391
D-(+)-glucosio	Sigma-Aldrich	G8270	Destrosio
acido borico, H3BO4	Mallinckrodt Baker Inc.	2549-04
Solfato di zinco 7-idrato, ZnSO4• 7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	8880-12
Cloruro manganoso 4-idrato, MnCl2• 4H2O	JT Baker	2540-04
Solfato di rame(II) 5-idrato, CuSO4• 5H2O	Sigma-Aldrich	209198
Eptamolibdato di ammonio 4-idrato, (NH4)6Mo7O24• 4H2O	Sigma-Aldrich	431346
Cloruro di calcio diidrato, CaCl2• 2H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	4160-12
Cloruro di sodio, NaCl	Mallinckrodt Baker Inc.	7581-12
Solfato ferroso 7-idrato, FeSO4• 7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	5056-12
Pipet-aid	Drummond Scientific	4-000-110	Cordless EtOH la superficie
10 ml pipetta sterile in polistirene	BD Biosciences	357551
Gutter Guard	Thermwell Products Co.	VX620	Pre-strofinato con sapone Ferramenta
Solfato di calcio emiidrato, CaSO4• 0.5H2O	Acros Organics	385355000
#4 trivella da sughero	Boekel Scientific	1601
Parafilm "M"	Pechiney Imballaggio in plastica	PM-996