Approccio stereotassico della Cisterna Magna per la somministrazione terapeutica in un modello murino

Abstract

Fonte: Joshi, K., et al. Approccio chirurgico stereotassico per microiniettare il tronco encefalico caudale e il midollo spinale cervicale superiore attraverso la cisterna magna nei topi. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra l'approccio stereotassico della cisterna magna per la somministrazione mirata al tronco encefalico e al midollo spinale superiore. Accedendo alla cisterna magna piena di liquido cerebrospinale, questo approccio consente iniezioni precise in aree difficili da raggiungere con metodi stereotassici standard.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Apertura della membrana cisternale

1. Utilizzare la pinza Dumont angolata per afferrare la dura, che si estende dall'osso occipitale all'atlante. Afferrare la dura madre vicino all'osso occipitale e utilizzare le forbici a molla per creare una piccola apertura (~0,5-1,5 mm) nella dura dura.
   NOTA: In questa posizione rostrale, lo spazio tra il tronco encefalico e la dura madre sovrastante è più ampio, fornendo ampio spazio per una manipolazione sicura della dura.
2. Usa le forbici a molla per sollevare la dura madre e aprirla ulteriormente. La dimensione della finestra dipende dal bersaglio.
   NOTA: Sarà necessaria una finestra più ampia quando si effettuano iniezioni longitudinali multiple o iniezioni bilaterali; Una piccola finestra sarà sufficiente quando si effettuano singole iniezioni unilaterali o sulla linea mediana.
3. Una volta aperta la dura madre, drenare il liquido cerebrospinale in eccesso con una punta sterile.

2. Identificazione dei punti di riferimento e del punto zero

1. Visualizza la superficie dorsale del tronco encefalico con punti di riferimento dettagliati attraverso la dura aperta . L'obex, il punto in cui il canale centrale si apre nel ventricolo IV, è il punto zero standard antero-posteriore e mediolaterale.

3. Iniezione del bersaglio

1. Abbassare la pipetta o la siringa sul bersaglio utilizzando il braccio stereotassico e iniettare la soluzione come per gli approcci stereotassici standard. Lasciare in posa per 1-5 minuti dopo l'iniezione per evitare la formazione di tracce dell'ago quando si utilizzano volumi compresi tra 3 e 50 nL. Quindi, sollevare la pipetta o la siringa utilizzando il braccio stereotassico.
2. Ripetere il passaggio 3.1. per più destinazioni.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Pinze angolate, Dumont 5/45	FST	11251-35	Solo per afferrare la dura
Forbici a molla, Vannas 2.5mm con scatola di accompagnamento	FST	15002-08	Forbici solo per aprire la dura, scatola per sollevare il corpo
Micromanipolatore stereotassico	Kopf	1760-61	Attaccato al portaelettrodo per regolare la posizione in base alle coordinate
Gruppo telaio stereotassico a "U" e piastra di base intracellulare	Kopf	1730-B, 1711	Telaio per chirurgia
Applicatori sterili con punta in cotone	Puritan	25-806 10WC	Assorbimento del sangue dal campo chirurgico