Somministrazione di farmaci oftalmici per la neuromodulazione non invasiva in un modello murino

Abstract

Fonte: Zhan, J., et al. Strategie non invasive per la manipolazione cronica dell'attività neuronale controllata da DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video dimostra un metodo di somministrazione di farmaci oftalmici non invasivi per la neuromodulazione mirata. Il farmaco viene somministrato tramite collirio, assorbito nella circolazione, attraversa la barriera emato-encefalica e attiva specifici recettori neuronali.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Somministrazione ripetitiva di clozapina-N-ossido (CNO) utilizzando colliri

1. Acclimatare gli animali alla manipolazione strofinando ogni topo 3 minuti al giorno per 3-4 giorni prima della somministrazione del collirio.
2. Sciogliere la clozapina-N-ossido (CNO, 5 mg) in 1 mL di soluzione salina sterile allo 0,9% (soluzione madre: 5 mg CNO/mL). Conservare la soluzione in frigorifero a 4°C.
3. Pesare ogni topo prima di iniziare l'esperimento per determinare la quantità di CNO da erogare. Utilizzare 1-3 μL di gocce (per occhio) per ottenere 1,0 mg di CNO/kg di peso corporeo.
   NOTA: Ad esempio, un topo da 20 g dovrebbe ricevere colliri bilaterali (2 μL ciascuno).
4. Erogare il collirio durante la fase di inattività (luce) dei topi, 2 ore prima che le luci si spengano (zeitgeber time (ZT) 10). Nei casi in cui il CNO deve essere somministrato durante la fase attiva (buio) dei topi, assicurarsi della presenza di una luce rossa fioca per una corretta manipolazione degli animali.
   NOTA: Dovrebbero essere prese precauzioni per evitare di interrompere il ciclo circadiano (e luce/buio) degli animali da esperimento.
   1. Utilizzando una micropipetta P10, caricare la quantità richiesta (1-3 μL) di soluzione CNO per ottenere 1,0 mg CNO/ kg.
      NOTA: Utilizzare un puntale per pipetta nuovo e sterile per ogni collirio. In questa serie di esperimenti, sono stati eseguiti colliri bilaterali di CNO; tuttavia, se è richiesta una concentrazione di CNO inferiore, potrebbero essere applicati anche colliri unilaterali.
   2. Immobilizza il mouse tramite la collottola.
   3. Espellere lentamente la soluzione fino a formare una gocciolina stabile sul puntale della pipetta.
   4. Avvicinare con cautela la gocciolina alla cornea dell'occhio del topo fino a quando la soluzione non viene erogata. La punta della pipetta non deve mai entrare in contatto con l'occhio del topo.
   5. Rilascia il mouse, rimettendolo nella sua gabbia di casa.
5. Ripetere questa procedura ogni giorno per 5 giorni.
   NOTA: Questa durata può essere regolata secondo i requisiti sperimentali.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Polvere liofilizzata ≥96% (elettroforesi su gel di agarosio)
Topi C57BL/6J	The Jackson laboratory	#000664	topi maschi
3 mesi Capillaries	Drummond Società scientifica	#3-000-203-G/X	Diametro esterno: 1,14 pollici.
Clozapina-N-ossido	Sigma	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	Isoflurano, USP
Microinjector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Iniettore di nanolitri programmabile
Mezzi di montaggio	Invitrogen	#P36930	Reagente antidissolvenza Prolong Gold

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