Articolo metodologico

Espressione genica tramite elettroporazione di una singola cellula in colture di fette di ippocampo di topo

29 agosto 2025

In questo articolo

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Keener, D. G., et al. Elettroporazione a singola cellula in diverse colture organotipiche di neuroni eccitatori eccitatori e inibitori specifici di classe dell'ippocampo di topo. J. Vis. Exp. (2020).

Questo video mostra il processo di elettroporazione a singola cellula per introdurre il DNA plasmidico nei neuroni all'interno di colture di fette di ippocampo di topo. La procedura prevede il posizionamento preciso della pipetta, la regolazione della pressione e gli impulsi di elettroporazione per permeabilizzare transitoriamente la membrana neuronale, facilitando il trasferimento genico. Dopo l'elettroporazione, la fetta viene incubata per consentire l'espressione del gene di interesse introdotto.

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono campioni di animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali appropriato.

1. Preparazione della coltura della fetta

  1. Preparare le colture organotipiche della fetta ippocampale del topo come descritto in precedenza, utilizzando topi postnatali di 6-7 giorni di entrambi i sessi.
    1. Preparare i terreni di dissezione per la coltura organotipica di fette costituite da (in mM): 238 saccarosio, 2,5 KCl, 1 CaCl₂, 4 MgCl₂, 26 NaHCO₃, 1 NaH₂PO₄ e 11 glucosio in acqua deionizzata, quindi gas con 5% CO₂/95% O₂ a un pH di 7,4.
    2. Preparare terreni di coltu....

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Risultati

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figure-results-1

Figura 1: Due immagini rappresentative di pipette di vetro. (A) Visualizzare pipette a resistenza inferiore (6,5 MΩ), utilizzate in questo protocollo, e (B) pipette a resistenza superiore (10,4 MΩ) tipiche .......

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Purificazione Plasmidi
Preparazione organotipica di colture di fette
LeganteBD C150-UL
Trinciatessuti McIlwainTED PELLA, INC.10180Tritatutto per la preparazione di colture organotipiche di fette
Inserto per colture cellulari Millicell, 30 mmMilliporePIHP03050Inserti per colture di fette organotipiche
OsmometroPrecision SystemsOSMETTE II
Spatole rivestite in PTFECole-ParmerSK-06369-11
ForbiciFST14958-09
StereomicroscopioOlympusSZ61
Sistema di filtrazione sottovuoto sterileMilliporeSCGPT01REFiltrazione e conservazione di aCSF
elettrodi
Vetri capillariWarnerInstruments 640796
Estrattore per micropipettatoreSutter InstrumentP-1000Estrattore
per fornoBD(E2)
Estrattore per filamentiSutter InstrumentFB330B
Estrattore
3,5 mm Falcon Petri PiattiBD Falcon353001
AirtableTMC63-7512E
Sistema di elettroporazioneDispositivi molecolariAxoporator 800AElettroporatore
Kit di per la preparazione dei plasmidi Qiagen 12362 Piastre a 6 pozzetti GREINER BIO-ONE 657160 Dumont #5/45 Pinze FST#5/45 Pinze di dissezione angolate per la preparazione di colture di fette organotipiche Unità di filtro per palloni Millipore SCHVU02RE Filtrazione e conservazione dei terreni di coltura Incubatore Preparazione degli per elettroporazione a cella singola

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Tag

Coltura di fette ippocampalitrasferimento di DNA plasmidicopermeabilizzazione della membrana neuronaleapplicazione di impulsi di elettroporazionetecnica di ciclaggio a pressionepreparazione della coltura di fetteperfusione con tetrodotossinagene di interesse

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