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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
Sono stati utilizzati topi maschi adulti C57BL/6N di otto settimane.
1. Configurazione preoperatoria
- Garantire una scorta adeguata di strumenti chirurgici sterilizzati in autoclave, attrezzature, farmaci analgesici e farmaci anestetici.
- Garantire uno spazio di lavoro adeguato su un tavolo operatorio.
- Prepara il tavolo operatorio utilizzando un pannello in schiuma chirurgica personalizzato ricoperto di pannolino come letto per il topo. Fissare un cuscinetto riscaldante al pannello di schiuma con nastro adesivo medico coperto con garza sterile.
- Crea divaricatori piegando un ago per agopuntura usando una pinza vascolare, piegandolo a metà e quindi piegando la punta dell'ago per agopuntura piegato in un gancio. Fissare una striscia di gomma all'estremità dell'ago per agopuntura e utilizzare una puntina da disegno per fissare l'estremità della striscia di gomma al pannello di schiuma.
- Calibrare lo stereomicroscopio; scegliere uno stereomicroscopio con una distanza di messa a fuoco adeguata. Coprire i pulsanti di zoom/messa a fuoco con un foglio di alluminio sterilizzato per consentire al chirurgo di regolarli durante l'operazione. Il foglio di alluminio sterilizzato è stato posizionato sui pulsanti di zoom/messa a fuoco, consentendo al chirurgo di utilizzarlo con guanti sterili.
2. Anestesia e preparazione del topo
- Pesare il topo e anestetizzarlo in base al suo peso corporeo (isoflurano 3%). Assicurarsi che il topo non risponda quando gli spazi interdigitali della zampa vengono pizzicati per confermare la profondità dell'anestesia. Un'adeguata profondità di anestesia deve essere mantenuta durante tutta la procedura (1% di isoflurano).
- Applicare un unguento oftalmico bilateralmente sugli occhi per prevenire l'irritazione o la secchezza della cornea durante l'intervento chirurgico.
- Preparare il sito chirurgico radendo il pelo del collo e del torace con un tagliacapelli automatico. Rimuovere e pulire i capelli sciolti.
- Posizionare il mouse in posizione supina sul tappetino riscaldante coperto con una garza sterile. Mantenere la temperatura del mouse a 37 °C durante l'intera operazione. Fissa il mouse con del nastro adesivo per far sì che gli arti anteriori si adattino orizzontalmente e impediscano il movimento degli arti posteriori e della coda. Sui topi è stato posizionato un telo chirurgico monouso sterilizzato con un'apertura appropriata.
3. Procedura operativa
- Iniettare tramadolo come analgesia preventiva (20 mg/kg, intraperitoneale o i.p.). Segnare l'incisione trasversale sul bordo superiore della clavicola. Utilizzare tre cicli di scrub alternati di soluzione disinfettante iodoforo ed etanolo per disinfettare il sito chirurgico. Confermare la profondità dell'anestesia con un pizzico di dita dei piedi prima dell'intervento chirurgico.
- Lavorando al microscopio, praticare un'incisione trasversale di 4 mm lungo il segno utilizzando un bisturi sterile. Ingrandire l'incisione durante la procedura se necessario.
- Sezionare senza mezzi termini la fascia sottocutanea e identificare il bordo inferiore della ghiandola sottomandibolare. Tirare la ghiandola sottomandibolare verso l'alto per esporre la fossa sopraclavicolare e lo sterno.
NOTA: Potrebbero esserci vasi sanguigni di piccolo calibro in quest'area. L'elettrocauterizzazione può essere utilizzata per fermare l'emorragia. - Praticare un'incisione parziale della sternotomia mediana (~4 mm) incidendo lo sterno dalla testa alla coda lungo la linea mediana. Proteggere la pleura, il cuore e i vasi sanguigni durante la sternotomia.
- Identificare il muscolo sternoioide. Tirare delicatamente lo sterno con due piccoli divaricatori personalizzati realizzati con aghi per agopuntura e identificare il muscolo sternoioide, sopra la trachea e l'esofago. Ritrarre questo muscolo per esporre l'arteria carotide, la vena giugulare interna, il nervo frenico, il nervo vago, la trachea e l'esofago.
NOTA: Ritrarre delicatamente lo sterno per evitare lo pneumotorace aperto. A differenza dell'uomo, l'esofago del topo non si trova dietro la trachea ma adiacente alla trachea sul lato sinistro. - Identificare il plesso brachiale sinistro. Sul bordo laterale della vena giugulare interna sinistra, tirare la fascia e il tessuto adiposo verso l'esterno per esporre il plesso brachiale. Cerca il tronco superiore, composto dai nervi cervicale o C5 e C6, che hanno tre rami. Identificare il tronco medio composto dal nervo C7 e il tronco inferiore composto dai nervi C8 e Toracico o T1, lungo il tronco superiore fino alla coda del topo.
NOTA: Ci sono vasi sanguigni longitudinali sulla superficie del plesso brachiale. Utilizzare l'elettrocauterizzazione per prevenire il sanguinamento. Quando si separa il plesso brachiale sinistro, proteggere il canale chiloso per evitare una fistola chilosa. - Raccogli il nervo C7 sinistro. Sezionare la divisione anteriore e la divisione posteriore del tronco medio (nervo C7) distalmente a livello della divisione al midollo sotto la clavicola e bloccare il nervo C7 con 0,1 ml di lidocaina al 2% mediante infusione locale nel tronco nervoso. Resecare il nervo C7 con le forbici a molla di Vannas nei suoi punti di fusione con il midollo laterale e il midollo posteriore. Tagliare il nervo C7 in modo che la lunghezza di ciascuna divisione sia simile.
NOTA: Le divisioni anteriore e posteriore del nervo C7 e le divisioni anteriore e posteriore dei tronchi superiore e inferiore corrono per una lunga distanza prima della confluenza, quindi il nervo C7 dovrebbe essere liberato a sufficienza prima della resezione. Infatti, non sempre il nervo C7 è diviso in due divisioni; A volte è diviso in tre divisioni o anche in quattro in rari casi. - Rimuovere la lamina ventralis C6 sinistra. Proteggere con cura il nervo frenico e recidere il muscolo scaleno anteriore a livello del segmento C6 per esporre la radice nervosa C7. Taglia piccoli rami del nervo C7 che innerva il muscolo paraspinale con micropinze. Estrarre delicatamente il nervo C7 e asportare con cura la lamina ventralis C6.
NOTA: C'è una prominenza ossea tra il lato mediale dell'arteria carotide sinistra e il lato laterale dell'esofago. Questa prominenza ossea è la lamina ventrale della 6a vertebra cervicale. Il muscolo longitudinale del bordo laterale della lamina ventrale C6 è il muscolo scaleno anteriore e il nervo frenico corre sulla superficie del muscolo scaleno anteriore. - Raccogli il giusto nervo C7. Recidere il muscolo scaleno anteriore sul lato destro, in modo simile al lato sinistro, e sezionare la radice nervosa C7 destra vicino al forame intervertebrale. Sezionare il nervo C7 destro dal suo livello di divisione.
NOTA: Tagliare con cura il nervo C7 destro per evitare danni ai vasi sanguigni sotto il nervo. - Trasferire il nervo C7 sinistro.
- Rimuovi il lungo colli muscolare accanto ai corpi vertebrali parzialmente su entrambi i lati. Separare ed espandere senza mezzi termini lo spazio tra la trachea-esofago e il corpo vertebrale.
- Inviare una sutura di nylon 5-0 piegata a metà dal lato destro del corpo vertebrale al lato sinistro attraverso la via prespinale.
- Agganciare il nervo C7 sinistro con un tubo per infusione e guidare il nervo sul lato destro attraverso la via prespinale.
- Ritrarre delicatamente la trachea e l'esofago e posizionare le divisioni anteriore e posteriore del nervo C7 sinistro alla radice nervosa C7 destra senza tensione utilizzando suture in nylon 12-0. Sutura l'epinevrio attorno ai nervi con 4-5 punti di sutura per coaptare fortemente i nervi.
NOTA: È fondamentale scegliere un tubo per infusione in plastica di spessore adeguato. Un tubo troppo sottile potrebbe danneggiare il nervo e un tubo troppo spesso potrebbe danneggiare la trachea e l'esofago. Inoltre, lo spazio tra la trachea-esofago e il corpo vertebrale è uno spazio a forma di "V" e il taglio di parte del lungo colli muscolare può accorciare la via di trasferimento.
4. Chiusura della ferita
- Irrigare la ferita con soluzione fisiologica sterile e asciugarla con una garza sterile.
- Sutura lo sterno e chiusura della pelle con suture monofilamento 5-0.
5. Assistenza postoperatoria
- Attendere che il topo si svegli dall'anestesia. Trasferisci il topo in una gabbia pulita senza lettiera, ma riscaldata con una coperta riscaldante. Osserva il topo fino a quando non è deambulante. Utilizzare il tramadolo (20 mg/kg, i.p.) come analgesia postoperatoria.
- Metti i topi in una gabbia di recupero e monitorala fino al recupero. Ripristina l'acqua e la dieta dei topi dopo l'operazione. Monitora i topi dopo l'intervento per segni di compromissione o infezione ogni giorno, tra cui malnutrizione, postura curva e pelo arruffato. A due settimane dall'intervento chirurgico, dovrebbe avvenire la rimozione della sutura.
NOTA: Applicare l'unguento all'eritromicina sulla superficie della ferita ogni giorno per tre giorni consecutivi. - Se si osservano complicazioni, come l'edema della ferita, queste devono essere risolte immediatamente.