Questo articolo descrive una tecnica di trapianto di tessuto che è stato progettato per verificare la segnalazione e le proprietà di patterning ectoderma cefalico superficie durante lo sviluppo cranio-facciale.
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Articolo metodologico
La valutazione delle proprietà di segnalazione di ectodermica epiteli durante lo sviluppo craniofacciale
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'accessibilità degli embrioni aviaria ha aiutato embriologi sperimentali capire il destino delle cellule durante lo sviluppo e il ruolo delle interazioni tessuti che regolano patterning e la morfogenesi dei vertebrati (ad esempio, 1, 2, 3, 4). Qui, illustrare un metodo che sfrutta questa accessibilità per testare la segnalazione e le proprietà patterning dei tessuti durante lo sviluppo ectodermica del viso. In questi esperimenti, creiamo quaglia-chick 5 o topo-chick 6 chimere trapiantando l'ectoderma cefalico superficie che copre la mascella superiore da quaglia o mouse sulla entrambi della stessa regione o di una regione ectopica di embrioni di pollo. L'uso di quaglia come tessuto del donatore per il trapianto in pulcini è stato sviluppato per trarre vantaggio da un marker nucleolare presente in quaglie, ma non le cellule pulcino, permettendo così agli investigatori di distinguere host e tessuti del donatore 7. Allo stesso modo, un elemento ripetitivo è presente nel genoma del topo ed è espressa ubiquitariamente, che ci permette di distinguere host e tessuti del donatore nel topo-chick chimere 8. L'uso di ectoderma mouse come tessuto del donatore amplieranno enormemente la nostra comprensione di queste interazioni dei tessuti, perché questo ci permetterà di testare le proprietà di segnalazione di ectoderma derivate da embrioni mutanti vari.
Protocollo
1. Preparazione del tessuto del donatore
- Preparare terreni di coltura, affinare le spine di vetro, affilare gli aghi di tungsteno.
- Raccogliere embrione dal guscio, lavare in gelide PBS.
- Usando una siringa da 10 ml e 18 gauge rimuovere 1,0 ml di albumina da l'estremità appuntita del guscio d'uovo.
- Fai un piccolo foro sulla parte superiore del guscio utilizzando il punto di forbici, e poi tagliare un'apertura circolare per esporre l'embrione
- Togliere la testa e il luogo in DMEM (siero libero, temperatura ambiente)
- Sezionare processo fronto-nasale dall'embrione (o sito altri donatori, c....
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Discussione
Usando questo metodo di trapianto ha permesso di determinare che l'ectoderma contiene informazioni di segnalazione che regola la polarità dorso-ventrale e l'estensione prossimo-distale della mascella superiore. La somiglianza dei risultati quando si usa quaglia o ectoderma mouse e la conservazione dei segnali molecolari in questo tessuto tra le molte specie 6,11 indica che questo è un centro altamente conservato di segnalazione tra i vertebrati. Inoltre, altri ricercatori hanno usato tecniche simili p.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato dalla R01-R01-DE018234 e DE019638.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 1x PBS | Tektronix, Inc. | TEKZR114 | |
| DMEM | Università della California - San Francisco | CCFDA003 | |
| BSA | Sigma-Aldrich | A7906 | |
| Dispasi | GIBCO, by Life Technologies | 17105-041 | |
| Piatto di Petri da 35x10 mm | Falcon BD | 1008 | |
| Pinzette Dumont n. 5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Forbici | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Forbici a molla | Fine Science Tools | 15010-11 | |
| Pinza per ago | Fine Science Tools | 26016-12 | |
| Ago in tungsteno | Fine Science Tools | 26000 | |
| Tubo microcapillare | Drummond Scientific | 3-000-225-G | |
| Pipette di Pasteur | Fisher Scientific | 13-678-6B | |
| Forbici a molla | Fine Science Tools | 15010-11 | |
| Porta-lama | Fine Science Tools | 10052-11 | |
| Lama da rasoio | Fine Science Tools | 10050-00 |
Riferimenti
- Noden, D. M. The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues. Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).
- Bronner-Fraser, M., Stern, C. Effects of Mesodermal Tissues on Avian Ne....
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Ristampe e permessi
