La valutazione delle proprietà di segnalazione di ectodermica epiteli durante lo sviluppo craniofacciale

Summary

Questo articolo descrive una tecnica di trapianto di tessuto che è stato progettato per verificare la segnalazione e le proprietà di patterning ectoderma cefalico superficie durante lo sviluppo cranio-facciale.

Abstract

L'accessibilità degli embrioni aviaria ha aiutato embriologi sperimentali capire il destino delle cellule durante lo sviluppo e il ruolo delle interazioni tessuti che regolano patterning e la morfogenesi dei vertebrati (ad ^{esempio, 1, 2, 3, 4).} Qui, illustrare un metodo che sfrutta questa accessibilità per testare la segnalazione e le proprietà patterning dei tessuti durante lo sviluppo ectodermica del viso. In questi esperimenti, creiamo quaglia-chick ⁵ o topo-chick ⁶ chimere trapiantando l'ectoderma cefalico superficie che copre la mascella superiore da quaglia o mouse sulla entrambi della stessa regione o di una regione ectopica di embrioni di pollo. L'uso di quaglia come tessuto del donatore per il trapianto in pulcini è stato sviluppato per trarre vantaggio da un marker nucleolare presente in quaglie, ma non le cellule pulcino, permettendo così agli investigatori di distinguere host e tessuti del donatore ^7. Allo stesso modo, un elemento ripetitivo è presente nel genoma del topo ed è espressa ubiquitariamente, che ci permette di distinguere host e tessuti del donatore nel topo-chick chimere ^8. L'uso di ectoderma mouse come tessuto del donatore amplieranno enormemente la nostra comprensione di queste interazioni dei tessuti, perché questo ci permetterà di testare le proprietà di segnalazione di ectoderma derivate da embrioni mutanti vari.

Protocol

1. Preparazione del tessuto del donatore

1. Preparare terreni di coltura, affinare le spine di vetro, affilare gli aghi di tungsteno.
2. Raccogliere embrione dal guscio, lavare in gelide PBS.
   1. Usando una siringa da 10 ml e 18 gauge rimuovere 1,0 ml di albumina da l'estremità appuntita del guscio d'uovo.
   2. Fai un piccolo foro sulla parte superiore del guscio utilizzando il punto di forbici, e poi tagliare un'apertura circolare per esporre l'embrione
3. Togliere la testa e il luogo in DMEM (siero libero, temperatura ambiente)
4. Sezionare processo fronto-nasale dall'embrione (o sito altri donatori, c....

Discussion

Usando questo metodo di trapianto ha permesso di determinare che l'ectoderma contiene informazioni di segnalazione che regola la polarità dorso-ventrale e l'estensione prossimo-distale della mascella superiore. La somiglianza dei risultati quando si usa quaglia o ectoderma mouse e la conservazione dei segnali molecolari in questo tessuto tra le molte specie ^6,11 indica che questo è un centro altamente conservato di segnalazione tra i vertebrati. Inoltre, altri ricercatori hanno usato tecniche simili p.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	Università della California - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispase	GIBCO, di Life Technologies	17105-041
35x10 mm Piastra di Petri	Falcon BD	1008
No. 5 Pinze Dumont	Strumenti per scienze fini	11252-20
Forbici	Fine Science Tools	14058-11
Forbici a molla	Fine Science Tools	15010-11
Porta aghi	Fine Science Tools	26016-12
Ago al tungsteno	Fine Science Tools	26000
Tubo microcapillare	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur Pipets	Fisher Scientific	13-678-6B
Forbici a molla	Strumenti per le scienze	15010-11
Supporto per lama	Strumenti per le scienze	10052-11
Lama per rasoio	Strumenti per le scienze	10050-00