Un gradiente di generazione del dispositivo Microfluidic di Biologia Cellulare

Summary

Abbiamo descritto un protocollo per la microfabbricazione del gradiente apparecchio che può generare microfluidi che possono generare gradienti spaziali e temporali ben definite microambiente. In questo approccio, il gradiente di generazione dispositivo a microfluidi può essere utilizzato per studiare la migrazione delle cellule diretto, l'embriogenesi, la guarigione delle ferite, e le metastasi del cancro.

Abstract

La fabbricazione e il funzionamento di un gradiente che generano dispositivo a microfluidi per studiare il comportamento cellulare è descritto. Una piattaforma microfluidica è uno strumento che permette di sperimentazione, perché può manipolare con precisione i flussi di liquidi, consentono high-throughput esperimenti, e generare stabile gradienti di concentrazione solubile. Rispetto ai convenzionali generatori di pendenza, poli (dimetilsiloxano) (PDMS) microfluidica dispositivi basati in grado di generare gradienti di concentrazione stabile di fattori di crescita ben definiti profili. Qui, abbiamo sviluppato semplice gradiente dispositivi che generano microfluidica con tre ingressi separati. Tre microcanali combinati in un unico microcanali per generare gradienti di concentrazione. La stabilità e la forma dei gradienti di fattori di crescita sono stati confermati da isothyiocyanate fluoresceina (FITC)-destrano con un peso molecolare simile al fattore di crescita epidermico (EGF). L'utilizzo di questo dispositivo a microfluidi, abbiamo dimostrato che i fibroblasti esposti a gradienti di concentrazione di EGF migrati verso concentrazioni più elevate. L'orientamento direzionale di migrazione delle cellule e della motilità delle cellule migrano sono state quantitativamente valutate attraverso l'analisi delle cellule di tracking. Così, questo gradiente apparecchio che può generare microfluidi potrebbe essere utile per studiare e analizzare il comportamento delle cellule migrano.

Protocol

Microfabrication A. del gradiente di generazione dispositivo a microfluidi

1. Il wafer di silicio viene trattato con plasma di ossigeno reattivo (5 min a 30 W, Harrick scientifico, NY).
2. Photoresist negativo (SU-8 50, MicroChem, MA) è spin-rivestito a 1000 rpm per 1 minuto su un wafer di silicio.
3. Il wafer è morbido al forno a 65 ° C per 10 minuti e successivamente a 95 ° C per 30 minuti su una piastra.
4. Il wafer viene esposto alla luce UV (200W) per 3 minuti attraverso una maschera di trasparenza con una dimensione minima di 30 micron.
5. Il wafer è post forno a 65 ° C per 1 minuto e 95 ° C per 10 min.
6. Si stampo pa....

Discussion

Cellule esposte a gradienti di concentrazione stabile di EGF in un dispositivo a microfluidi migrato verso concentrazioni più elevate. L'orientamento direzionale della migrazione cellulare, indice chemiotattica, la motilità delle cellule migrano sono state indagate attraverso l'analisi delle cellule di tracking. Pertanto, questo gradiente di generazione piattaforma microfluidica potrebbe essere utile per studiare le metastasi del cancro, l'embriogenesi, e la guida degli assoni.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagente Dextran-FITC		Sigma-Aldrich	FD10S	Isotiocianato di fluoresceina (FITC) destrano coniugato (10kD)
hr-EGF		Invitrogen	13247-051	fattore di crescita epidermico ricombinante umano
PDMS		K.R. Anderson Co.	2065622	Poli(dimetilsilossano) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8,6 lb)
Fotoresist		MicroChem Corp.	SU-8 50
Si wafer wafer				in silicone,
				di Petri
Tubo		BD Biosciences	PE 20
PBS		Invitrogen
Fibronectin
NIH 3T3	cell-line			cellule di fibroblasti
Microscopio		Nikon Instruments	TE 2000